IRES序列连接的D-氨基酸氧化酶与绿色荧光蛋白基因导入K562e细胞的表达

摘要

内部核糖体进入位点(IRES)序列来源于脑心肌炎病毒,它可翻译一条mRNA上的两个开放读框,由其连接的两个基因的表达率相同.本实验应用以IRES序列连接D-氨基酸氧化酶(DAAO)和绿色荧光(GFP)基因构建的逆转录病毒载体,转染K562e细胞获得稳定表达GFP的单克隆细胞KDIGC和KDfGd,测定转基因细胞的荧光阳性率以及荧光强度,用D-丙氨酸(D-Ala)作用DAAO+细胞,并用酚红氧化法测定培养上清H2O2.结果表明,KDfGC和KDfaGD细胞的荧光阳性率分别为94.64%,96.31%;2×104细胞的荧光强度分别为202 U和174 U.GFP荧光强度与H2O2的产量间呈指数相关.结论:IRES序列调控的双基因可同时表达,GFP的荧光强度可以间接地反映DAAO基因的表达水平,为了解目的基因表达水平高低提供了新的方法.