血小板膜受体糖蛋白Ⅰb-Ⅸ-Ⅴ复合物在瞬时转染的HEK 293T细胞中的异常表达

摘要

血小板膜受体糖蛋白(glycoprotein,GP) Ⅰb-Ⅸ-Ⅴ复合物在血小板活化过程中起到关键作用,因此其结构及功能一直是研究的热点和难点.由于血小板缺乏细胞核,研究者通常需将野生型或突变型的GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ基因转染至其他哺乳动物细胞系中(如CHO、HEK 293T等)以研究其结构与功能,因此GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物在这些细胞系中是否能如实的反映其在血小板中的情况,是决定这些细胞系是否适合GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物研究的关键.本研究通过检测GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物在不同细胞系中的表达情况,明确细胞系差异是否可能干扰复合物的表达,进而找出研究GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物的最适细胞系.在不同种属、不同组织来源的常用细胞系(如CHO、HEK 293T、HeLa等)中单独或共转染GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物的亚基,并用流式细胞术检测GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物在膜表面的表达量.结果发现:CHO细胞在瞬时转染与稳定转染后GPV在细胞膜表面表达依赖于其与GPⅠb-Ⅸ复合物的相互作用,与血小板中的情况一致.相反,在HEK 293T细胞系中,尽管GPⅠb-Ⅸ复合物的表达情况与CHO细胞及血小板中一致,但是GPV在细胞膜表面的表达不再依赖于GPⅠb-Ⅸ复合物；进一步在HeLa、MES13及HUVEC细胞系中的研究发现,GPV可以在HeLa及MES13细胞膜上独立表达,但是在HUVEC细胞表面不表达,提示GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物各亚基之间的依赖性(进而表现为膜表面的表达量)在不同的细胞系中有所不同.结论:本研究为今后对于GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物的研究具有一定的指导意义,尤其是在细胞系的选择上.HEK 293T细胞系极可能对研究结果造成偏倚,因而并非研究GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ复合物尤其是GPV亚基的最佳选择.