大肠杆菌caiE基因的克隆与高效表达

摘要

用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱代谢相关酶基因cai E,将其克隆到克隆载体pBluescript SK中,测序表明:该基因有612bp,与文献报道相比,有10个核苷酸不同,相应的翻译氨基酸有6个相异.将该基因重组到ColE1为复制子、T7为启动子控制下的分泌型表达载体pET-22b(+)中,构建表达质粒pETCaiE;重组到载体pACYC184中构建以p15A为复制子、Lac为启动子的表达质粒pACYC-CaiE;重组到载体pWSK129中,构建以pSC101为复制子、T7为启动子的表达质粒pSC-CaiE.上述表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,均可表达.SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约26ku,表达量占菌体总蛋白质的比例分别为pETCaiE 30%,pACYC-CaiE 8%,pSC-CaiE 5%.