番红菌素中碳甲基转移酶(SfcF)的表达纯化及酶活性的检测

摘要

研究了番红菌素生物合成过程中的一个碳甲基转移酶(SfcF)的酶活反应时间曲线和动力学参数,并证明了其催化功能.通过镍柱亲和层析纯化得到碳甲基转移酶,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其分子量大小后,以酪氨酸(Tyr)为底物,采用高效液相色谱法(HPLC)检测碳甲基转移酶的生物催化活性并分析得到其酶动力学数据.在碳甲基转移酶的生物催化作用下,可实现酪氨酸羟基邻位碳的甲基化,得到3-甲基酪氨酸.通过时间曲线的测定,发现反应时间在50 min以内,酪氨酸浓度低于400μmol/L时,底物的转化率与时间呈线性变化.通过碳甲基转移酶的活性检测和动力学常数的测定,为深入研究番红菌素的生物合成机制奠定了基础,并为其结构类似物ET-743(成药)的合成研究提供有益参考.