地塞米松刺激HepG2细胞内源性NTCP表达及在抗HBV药物筛选中的应用

摘要

目的观察地塞米松处理人肝癌细胞HepG_2对细胞内源性NTCP mRNA的表达影响,以及刺激后该体系在抗HBV药物筛选中的应用。方法采用不同浓度地塞米松刺激HepG_2细胞,处理后不同时间提取HepG_2细胞中总RNA,实时荧光定量PCR检测NTCP mRNA表达量,确定刺激NTCP mRNA表达最佳浓度及时间。采用最佳浓度和时间刺激HepG_2细胞,洗去培养基中残留地塞米松,实时荧光定量PCR检测NTCP mRNA表达变化。用HepG_2.2.15细胞培养上清浓缩HBV感染地塞米松刺激后的HepG_2细胞,ELISA检测细胞培养上清中HBs Ag。最后,采用阳性药物验证该体系的有效性、可行性。结果 0.5μm地塞米松刺激HepG_2细胞24h时NTCP mRNA表达量最高。撤去地塞米松后96h内,HepG_2细胞中内源性NTCP mRNA的表达有一定程度的下降并维持在一定水平。HBV感染地塞米松刺激后的HepG_2细胞后,在培养上清中能够检测到乙肝表面抗原。在该体系中,阿德福韦酯抗HBV活性的EC50为0.26μm,环孢菌素A的EC_(50)为0.19μm。结论地塞米松能够上调HepG_2细胞内源性NTCP mRNA的表达,能够更有效地介导HBV感染,且可以应用于抗HBV药物筛选。