克鲁维酵母菊粉酶基因在毕赤酵母中的表达

摘要

从菊粉酶酶源菌株克鲁维酵母GKluyveromyces marxianus)Y109中提取菊粉酶基因,PCR扩增 Y109的菊粉酶基因 inuB1,核苷酸序列测定分析表明 inuB1的阅读框架全长1 665 bp,没有内含子,其中存在4个潜在的N-糖基化位点 .以pPIC9K为表达载体,构建inuB1的酵母转化载体,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,获得菊粉酶基因工程菌GS115/inuB1.GS115/inuB1甲醇诱导发酵表达菊粉酶,inuB1基因重组胞外菊粉酶表观分子量为90 kD(SDS-PAGE),比酶活性是12.29 U/mg.