扣囊复膜孢酵母α-淀粉酶基因在乳酸克鲁维酵母中的表达与重组酶性质

摘要

通过PCR方法从扣囊复膜孢酵母基因组DNA中克隆获得α-淀粉酶基因成熟肽编码区(SfA),插入乳酸克鲁维酵母表达载体pKLAC1的α因子信号肽下游,构建重组表达载体pKLAC1-SfA.重组载体转化乳酸克鲁维酵母GG799,筛选获得表达α-淀粉酶SfA水平较高的重组菌.酶活检测和SDS-PAGE电泳检测均显示,重组菌分泌重组酶SfA到发酵液中.酶学性质研究表明:SfA最适温度为45℃,最适pH 5.0,在pH4.5 ～5.5、50℃条件下保持稳定.Ca2+等二价金属离子对SfA酶活有激活作用,EDTA强烈的抑制SfA活性.HPLC分析显示SfA水解糊精获得麦芽寡糖和少量葡萄糖,其中麦芽三糖是主要产物,占水解产物总量的52％.