实时荧光定量RT-PCR检测急性白血病中Bmi-1基因mRNA的表达及意义

摘要

[目的]建立荧光实时定量RT-PCR ( FQ RT-PCR)检测Bmi-1基因mRNA的方法并研究该基因在急性白血病细胞中表达的意义.[方法]根据 Genbank提供的序列,设计目的基因Bmi-1及内参基因GAPDH的扩增引物,将 Bmi-1及GAPDH RT-PCR扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,经测序鉴定正确后,进行纯化、定量及系列稀释,应用 SYBR GreenⅠ荧光染料,建立检测Bmi-1 mRNA的FQ RT-PCR方法,并对其线性及特异性进行评价.应用此方法检测21例急性白血病及10例健康人外周抗凝血中Bmi-1 mRNA的表达水平.[结果]该方法的线性范围为1.0×103～1.0×108copies/μL,相关系数为-1.00,熔解曲线分析扩增产物显示单一的峰,熔解温度(Tm)为80.4℃.急性白血病患者的相对表达量为0.56±0.12,健康对照组中Bmi-1 mRNA的相对表达量为0.19±0.08,两者的表达差异有统计学意义(P<0.05).[结论]实时荧光定量RT-PCR方法检测Bmi-1基因表达,具有高敏感性和高特异性等优点,可作为进一步研究 Bmi-1基因的方法.Bmi-1基因参与急性白血病的发生,可能是一种新的肿瘤标志物.