严重烫伤影响家兔外周血中性粒细胞的蛋白质组学研究

摘要

[目的]研究严重烫伤对家兔外周血中性粒细胞蛋白质组的影响.[方法]12只家兔分为A、B两组(每组6只),A组为对照组(假烫处理)、B组为严重烫伤组(30%TBSA,Ⅲ度).A组假烫、B组烫伤后24h经颈动脉采血分离中性粒细胞.裂解细胞,提取蛋白质.利用固相pH梯度胶条(240mm×3mm×0.5mm,pH 3～10)及SDS-PAGE双向凝胶电泳分离蛋白质,考马斯亮蓝染色,图像扫描,PDQuest软件分析图像,筛选出差异表达蛋白质点.再从凝胶上切割差异蛋白质点,胰酶消化,应用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱分析,得到肽质量指纹图,再利用Mascot软件搜索数据库,鉴定蛋白质.[结果]建立了家兔外周血中性粒细胞蛋白质2-DE图谱.A、B组平均蛋白质点数分别为(759±20)个、(749±27)个,平均匹配率分别为93%、91%.两组间筛选出19个差异蛋白质点,鉴定了其中8个,包括7种蛋白质.[结论]家兔严重烫伤后外周血中性粒细胞蛋白质组发生改变,表达变化的蛋白质包括蛋白质二硫键异构酶、β-肌动蛋白、膜联蛋白Ⅰ、巯基特异性抗氧化蛋白等,功能涉及细胞内酶活性、细胞能动功能及可变形性、炎症、代谢、抗氧化能力、细胞凋亡等,这些蛋白质与严重烧伤后中性粒细胞功能改变有关.