菜籽源锌螯合肽的制备、纯化和结构解析

摘要

采用碱性蛋白酶水解菜籽蛋白制备水解物,运用固定金属亲和层析(IMAC-Zn2+)和葡聚糖凝胶G25(Sephadex G25)层析分离纯化;利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)和电喷雾电离质谱(ESI-MS)鉴定序列;采用EDTA络合滴定法(ECT)、双硫腙比色法(DCM)、原子吸收光谱(AAS)和电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)检测锌螯合率.试验表明:菜籽蛋白的4h水解物锌螯合潜力最佳;分离该水解物获得3个肽组分(Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ),其中Ⅱ和Ⅲ具有锌螯合能力;进一步分离后分别获得3个(Ⅱ-1,Ⅱ-2,Ⅱ-3)和2个肽组分(Ⅲ-1和Ⅲ-2),组分Ⅱ-3的锌螯合率最高,高于同浓度的谷胱甘肽(GSH)(P＜0.05);鉴定Ⅱ-3序列获得4条肽,即Ala-Arg (AR),Asn-Ser-Met (NSM),Gly-Lys-Arg (GKR)和Glu-Pro-Ser-His(EPSH).其中NSM的锌螯合率最高,来源于菜籽蛋白NADH-enoyl-ACP reductase Chain A序列中的296-298氨基酸残基.因此,菜籽蛋白可以作为微量元素螯合肽的优良来源.