重组幽门螺杆菌多价疫苗CTB-HUUL免疫治疗效果研究

摘要

目的 构建口服重组幽门螺杆菌(H.pylori)多价疫苗CTB-HpaA-UreA-UreB-CagL(CTB-HUUL),并探究其在BABL/c小鼠体内抗H.pylori SS1感染的免疫治疗效果.方法 根据文献资料查找H.pylori相关黏附分子(HpaA、UreA、UreB)抗原的显性表位序列HpaA88-100、HpaA132-141、UreA27-53、UreA183-203、UreB229-251、UreB317-329、UreB321-339、UreB373-385、UreB438-452、UreB546-561,在其C端引入H.pylori黏附分子抗原CagL,再在其N端引入分子内黏膜佐剂CTB,通过Linker(EFM、GS、KK)将其串联,构建重组质粒pET28a(+)/CTB-HapA-UreA-UreB-CagL[pET28a(+)/CTB-HUUL].将pET28a(+)/CTB-HUUL转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达后进行蛋白层析纯化,获得疫苗靶抗原CTB-HUUL,并采用Western Blot和ELISA对其进行免疫反应性和免疫原性鉴定.6周龄BABL/c小鼠,108 CFU,1次/d,进行灌胃,连续感染4次;末次灌胃后4周,灌胃CTB-HUUL重组蛋白200 μg·次-1·周-1,连续免疫治疗4次.末次免疫治疗后2周,脱颈处死小鼠,取小鼠胃组织进行H.pylori SS1计数和病理切片HE染色.结果 获得了高纯度的CTB-HUUL蛋白,Western Blot结果显示,CTB-HUUL可以与鼠抗H.pylori SS1血清及鼠抗CTB抗体发生特异性反应;ELISA检测结果显示,CTB-HUUL体外可以与重组蛋白rHpaA、rUreA、rUreB、rCagL发生特异性反应.CTB-HUUL组小鼠胃组织H.pylori SS1培养计数结果较CTB组和PBS组低(P＜0.01),CTB-HUUL组小鼠胃组织炎症损伤程度及炎症细胞浸润程度较CTB组和PBS组轻微.结论 口服重组H.pylori多价疫苗CTB-HUUL对感染H.pylori SS1的BABL/c小鼠具有免疫治疗效果.