构建携带幽门螺杆菌oipA核酸的减毒沙门重组菌株及其免疫保护作用的初步研究

摘要

目的:优化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)oipA核酸疫苗,构建含oipA核酸的SL7207(减毒伤寒沙门氏菌)重组菌株,并研究其在防御H.pylori感染中的作用.方法:对oipA基因进行密码子优化,Kozak前导序列添加、CpG序列优化,将oipA优化前后的基因分别克隆入pVAX1真核表达载体,获得pVAX1-oipA和pVAX1-optioipA重组子,将上述重组子与空载体pVAX1瞬时转染AGS细胞,应用Western blot检测转染细胞中OipA蛋白的表达.将重组子转化LB5000进行甲基化修饰,利用修饰后重组子转化终宿主菌SL7207,提取SL7207/pVAX1-oipA,SL7207/pVAX1-optioipA菌株质粒进行PCR,酶切鉴定.用SL7207/pVAX1-oipA和SL7207/pVAX1-optioipA免疫C57BL/6小鼠,末次免疫2周后检测抗OipA抗体,并在末次免疫4周后予H.pylori SS1(5 × 10~8CFU/只)攻击,攻击3次,隔天一次,攻击4周后处死动物,取胃组织做快速尿素酶实验和H.pylori定量培养以检测H.pylori感染状况.结果:pVAX1-oipA、pVAX1-optioipA均可在AGS细胞中表达,且pVAX1-optioipA的OiDA蛋白表达量高于pVAX1-oipA;从SL7207/pVAX1-oipA和SL7207/pVAX1-optioipA抽提的质粒,经PCR,酶切鉴定正确;免疫小鼠血清中产生抗OipA蛋白的特异性抗体IgG,且pVAX1-optioipA疫苗组诱导IgG水平明显高于pVAX1-oipA疫苗组(P＜0.01);pVAX1-oipA、pVAX1-optioipA疫苗组H.pylori感染率分别为60%(9/15)、26.67%(4/15),明显低于对照组100%(10/10)(P＜0.01).结论:成功构建携带pVAX1-oipA,pVAX1-optioipA的SL7207重组菌株,并验证其对C57BL/6小鼠H.pylori感染具有免疫预防作用,且优化oipn基因有助于提高免疫保护效果.