人幽门螺杆菌热休克蛋白A编码基因的克隆及表达

摘要

目的:扩增人幽门螺杆菌(Helicobacter py lori,Hp)热休克蛋白A(heat shock prot ein A,HspA)编码基因并构建其重组表达载体,进行核苷酸序列分析,并在E.coli BL21中表达,为疫苗的开发奠定了基础.方法:利用PCR技术从Hp基因组DNA中扩增热休克蛋白A(HspA)基因片段,目的基因经SacⅠ和XhoⅠ双酶切、纯化后,插入pET32a(+)载体.以含目的基因片段的重组载体转化大肠杆菌BL21并表达.结果:经PCR、酶切、测序分析表明 ,插入的基因片段为Hp HspA编码基因,与GenBank报道的相比较,核酸同源性达98%.经SDS-PAGE 分析,表达的融合蛋白分子量约为33 KD,其中目的蛋白的分子量约为13 KD.结论:成功地克隆并表达了Hp HspA编码基因,为HspA蛋白质疫苗的研制和快速诊断试剂盒的开发奠定了良好的基础.