热休克蛋白基因表达调节剂、医药品、化妆品和热休克蛋白基因表达调节剂的制造方法

摘要

本发明提供一种具备来自艾蒿或明日叶的乳杆菌(Lactobacillus)属的热休克蛋白基因表达调节剂。

说明书

技术领域

本发明涉及热休克蛋白基因表达调节剂、医药品、化妆品和热休克蛋白基因表达调节剂的制造方法。

背景技术

近年来，随着关于人的皮肤的结构、其新陈代谢的机理等的研究的发展，随着年龄增加在人的皮肤出现皱纹、细纹、色斑和松弛等变化的原因、机制正逐渐明确。皮肤由外侧的薄表皮(上皮组织)和其下层的厚真皮(结缔组织)构成。表皮作为身体的最外层，保护生物体免受外界伤害，而且并且防止内部的水分、营养物质漏出到外界。真皮是主要具有成纤维细胞、胶原纤维(胶原)、弹性纤维(弹性蛋白)和蛋白聚糖等复合地以三维状扩展的结构的结缔组织，担负给皮肤带来强度、伸展性和弹力性的作用。如果随着年龄增加而皮肤中的皮脂、水分的量减少，则皮肤表面的角质层的保湿力会丧失，容易产生因干燥等所致的细纹、肌肤粗糙。对此，提出了使用发酵品来进行皮肤功能的改善(例如，参照专利文献1～7)。另外，提出了通过给予山金车等的提取物来诱导热休克蛋白的表达，带来美白效果(例如，参照专利文献8)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开第2018/123828号

专利文献2：日本专利第5468183号公报

专利文献3：日本特开2015－156832号公报

专利文献4：日本专利第5467106号公报

专利文献5：日本专利第4990297号公报

专利文献6：日本特开2009－249366号公报

专利文献7：日本特开2009－249365号公报

专利文献8：日本专利第5697879号公报

发明内容

本发明的目的在于提供以天然成分为活性成分并起到广泛的效果的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品、化妆品和热休克蛋白基因表达调节剂的制造方法。

本发明的一个方面的热休克蛋白基因表达调节剂具备来自艾蒿或明日叶的乳杆菌(Lactobacillus)属。本发明的一个方面的医药品具备来自艾蒿或明日叶的乳杆菌(Lactobacillus)属。本发明的一个方面的化妆品具备来自艾蒿或明日叶的乳杆菌(Lactobacillus)属。本发明的一个方面的热休克蛋白基因表达调节剂的制造方法包括由艾蒿或明日叶得到乳杆菌(Lactobacillus)属。

根据本发明，能够提供以天然成分为活性成分并起到广泛的效果的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品、化妆品和热休克蛋白基因表达调节剂的制造方法。

附图说明

图1是表示实施例1的发酵液中含有的菌的解析结果的图和表。

图2是表示实施例2的发酵液中含有的菌的解析结果的图和表。

图3是表示实施例4的基因表达的解析结果的表。

图4是表示实施例4的基因表达的解析结果的表。

图5是表示实施例4的基因表达的解析结果的表。

图6是表示实施例4的基因表达的解析结果的表。

图7是表示实施例4的基因表达的解析结果的表。

图8是表示实施例4的基因表达的解析结果的表。

图9是给予了实施例5的发酵液后的人的照片。

图10是表示实施例6的发酵液的抗菌效果的图。

图11是表示实施例7的发酵液的抗真菌效果的图。

图12是表示实施例8的发酵液的抗病毒效果的图。

图13是表示实施例8的发酵液的抗病毒效果的图。

图14是表示实施例9的发酵液的抗白癣菌效果的图。

图15是表示实施例10的I型胶原的产生量的表。

图16是表示实施例10的HSP47的产生量的表。

图17是实施例11的SA－β－Gal染色后的细胞的显微镜图像。

图18是实施例11的SA－β－Gal染色后的细胞的显微镜图像。

图19是表示实施例11的SA－β－Gal染色的程度的表。

图20是表示实施例12的细胞存活率的表。

图21是表示实施例12的HSP70的产生量的表。

具体实施方式

以下，对本发明的实施方式进行详细说明。应予说明，以下示出的实施方式是对用于将本发明的技术思想具体化的装置、方法进行例示，且本发明的技术思想并不将构成部件的组合等限定于下述内容。本发明的技术思想可以在权利要求书的范围内进行各种变更。

实施方式的热休克蛋白(HSP)基因表达调节剂具备来自艾蒿或明日叶的乳杆菌(Lactobacillus)属。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂特别促进使抗老化功能提高的热休克蛋白(HSP)70基因的表达。乳杆菌属为乳酸杆菌的一种，是革兰氏阳性兼性厌氧菌。乳杆菌属使糖发酵而产生乳酸。乳杆菌属也栖息在包括人的动物体内，但实施方式的乳杆菌属为来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属。

例如，实施方式的乳杆菌属是使艾蒿或明日叶发酵而提取的。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂可以进一步具备艾蒿或明日叶的发酵液。

来自艾蒿的乳杆菌属例如包含parafarraginis种、parabuchneri种、buchneri种和harbinensis种等。来自明日叶的乳杆菌属例如包含vini种和nagelii种。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂可以包含乳杆菌属的多个种。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进热休克蛋白基因的表达。作为热休克蛋白基因的例子，可举出编码HSP70的HSPA1A基因和编码HSP27的HSPB1基因。HSP70具有美白促进功能、抗色斑功能、抗皱功能、抗应激功能、抗细胞死亡功能、抗炎功能、细胞保护功能、胃粘膜保护功能和抗DNA损伤功能。HSP27具有抗应激功能和创伤治愈功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂具备来自明日叶的乳杆菌(Lactobaci llus)属，促进HSP47的产生。HSP47为参与胶原的生物合成的分子伴侣。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂能够提高例如抗应激功能、抗细胞死亡功能、抗炎功能、细胞保护功能、胃粘膜保护功能、抗DNA损伤功能和创伤治愈功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自热休克蛋白表达促进、美白促进功能提高、抗色斑功能提高、抗皱功能提高、抗应激功能提高、抗细胞死亡功能提高、抗炎功能提高、细胞保护功能提高、胃粘膜保护功能提高、抗DNA损伤功能提高和创伤治愈中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。应予说明，皱纹包括细纹。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂还调节除热休克蛋白基因以外的表达。例如，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂抑制酸性神经酰胺分解酶(神经酰胺酶)基因的表达。作为酸性神经酰胺酶基因的例子，可举出ASAH1基因。为了抑制酸性神经酰胺酶的表达，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够促进神经酰胺生物合成，提高皮肤的屏障功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自神经酰胺酶表达抑制、神经酰胺生物合成促进和屏障功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进脂质合成酶基因的表达。作为脂质合成酶基因的例子，可举出DGAT1基因。DGAT1(二酰基甘油O－酰基转移酶1，DiacylglycerolO－acyltransferase 1)由二酰基甘油(DAG)合成中性脂肪(TAG)。DGAT1缺陷小鼠的皮肤的屏障功能产生异常。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够促进脂质合成，提高皮肤的屏障功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自脂质合成促进和屏障功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进溶酶体水解酶基因的表达。溶酶体在细胞中进行糖质、糖脂质的分解。为了发挥溶酶体的功能，需要溶酶体水解酶。作为溶酶体水解酶基因的例子，可举出酸性β－葡萄糖苷酶(GBA)基因。在溶酶体病的患者中，GBA的活性降低或缺失。另外，GBA的活化使皮肤的屏障功能提高。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够预防和治疗溶酶体病，提高皮肤的屏障功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自溶酶体水解酶表达促进、溶酶体功能提高、溶酶体病预防、溶酶体病治疗和屏障功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进紧密连接生物合成因子基因的表达。作为紧密连接生物合成因子基因的例子，可举出封闭蛋白1(CLDN1)基因和闭合蛋白(OCLN)基因。封闭蛋白和闭合蛋白为紧密连接的构成要素。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够促进紧密连接的生物合成，提高皮肤的屏障功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自紧密连接生物合成因子表达促进、封闭蛋白表达促进、闭合蛋白表达促进、紧密连接生物合成促进和屏障功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进细胞间粘附因子基因的表达。作为细胞间粘附因子基因的例子，可举出整合素α2(ITGA2)基因、E钙黏着蛋白(CDH1)基因和透明质酸受体(CD44)基因。整合素、钙黏着蛋白和CD44有助于细胞间粘附。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够促进细胞间粘附因子的生物合成，提高皮肤的屏障功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自细胞间粘附因子生物合成促进、整合素表达促进、钙黏着蛋白表达促进、透明质酸受体表达促进和屏障功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进温度敏感性TRP(瞬时受体电位，Transient receptor potential)通道基因的表达。作为TRP通道基因的例子，可举出TRPV3基因。TRPV3参与维持表皮屏障功能的角质形成细胞的增殖和分化。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够促进角质形成细胞的生物合成，提高皮肤的屏障功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自TRP通道表达促进、角质形成细胞生物合成促进和屏障功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进抗微生物分子基因的表达。作为抗微生物分子基因的例子，可举出Toll样受体2(TLR2)基因。Toll样受体具有感知微生物并激活免疫的功能。另外，作为抗微生物分子基因的例子，可举出DEFB1基因、DEFB4A基因和DEFB103A基因。DEFB1基因、DEFB4A基因和DEFB103A基因编码作为抗微生物肽的DEFB1、DEFB2和DEFB103等β防御素。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够提高抗微生物功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自Toll样受体表达促进、β防御素表达促进和抗微生物功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进瑟土因基因的表达。作为瑟土因基因的例子，可举出SIRT4基因。瑟土因基因的活性使抗老化功能提高。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够提高抗老化功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自瑟土因表达促进和抗老化功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进端粒酶基因的表达。作为端粒酶基因的例子，可举出TERT基因和TERC基因。如果促进端粒酶的活性，则细胞的寿命变长。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够提高抗老化功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂能够用作用于选自端粒酶表达促进和抗老化功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进能量代谢因子基因的表达。作为能量代谢因子基因的例子，可举出PPARGC1A基因。PPARGC1A基因编码PGC－1(过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1，Peroxisome proliferator－activated receptor gammacoactivator 1)。PGC－1促进能量代谢。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够提高能量代谢功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂能够用作用于选自能量代谢因子表达促进、PGC－1表达促进和能量代谢功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进透明质酸生物合成因子基因的表达。作为透明质酸生物合成因子基因的例子，可举出透明质酸合成酶1(HAS1)基因、透明质酸合成酶2(HAS2)基因和透明质酸合成酶3(HAS3)基因。

另外，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂抑制透明质酸分解因子基因的表达。作为透明质酸分解因子基因的例子，可举出透明质酸分解酶2(HYAL2)基因和细胞迁移诱导透明质酸结合蛋白(Cell migration－inducing and hyaluronan－bindingprotein)(CEMIP，KIAA1199)基因。

因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够提高透明质酸生物合成功能。透明质酸对变形性关节炎的预防和治疗、保湿功能提高、松弛的消除和皱纹的减少有效。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够预防和治疗变形性关节炎、提高保湿功能、减少松弛和皱纹。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自透明质酸合成酶表达促进、透明质酸分解因子表达抑制、透明质酸生物合成促进、变形性关节炎预防、变形性关节炎治疗、保湿功能提高、抗松弛功能提高和抗皱功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进基底膜生物合成因子基因的表达。作为基底膜生物合成因子基因的例子，可举出层粘连蛋白α1(LAMA1)基因、层粘连蛋白α5(LAMA5)基因、IV型胶原α1(COL4A1)基因和VII型胶原α1(COL7A1)。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够促进层粘连蛋白和胶原的生物合成，促进基底膜的生物合成。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自基底膜生物合成因子表达促进、层粘连蛋白表达促进、胶原表达促进和基底膜生物合成促进中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进I型胶原的表达。I型胶原对骨赋予弹力性。I型胶原对皮肤赋予强度。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂能够用作用于促进I型胶原的表达的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进基质金属蛋白酶抑制剂基因的表达。作为基质金属蛋白酶抑制剂基因的例子，可举出TIMP1基因。基质金属蛋白酶抑制剂抑制基质金属蛋白酶，抑制细胞外基质的分解。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够抑制细胞外基质的分解。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自基质金属蛋白酶抑制剂表达促进和细胞外基质分解抑制中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进抗氧化因子基因的表达。作为抗氧化因子基因的例，可举出超氧化物歧化酶3(SOD3)基因、过氧化氢酶(CAT)基因、谷胱甘肽还原酶(GSR)基因、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)基因、金属硫蛋白1F(MT1F)基因。SOD是分解活性氧的酶。CAT是分解过氧化氢的酶。GSR是还原氧化型谷胱甘肽的酶。GPX1是分解过氧化氢的酶。MT1F为抗氧化蛋白质。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够提高抗氧化功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自抗氧化因子基因表达促进、SOD表达促进、CAT表达促进、GSR表达促进、GPX1表达促进、MT1F表达促进和抗氧化功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进白细胞介素1受体拮抗分子(IL1RN)基因的表达。如果白细胞介素1受体拮抗分子缺失，则产生白细胞介素1受体拮抗分子缺乏症(DIRA)。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂能够预防和治疗DIRA。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自白细胞介素1受体拮抗分子表达促进、DIRA预防和DIRA治疗中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进脑信号蛋白(Semaphori n)基因的表达。作为脑信号蛋白基因的例子，可举出SEMA3A基因。脑信号蛋白为对神经轴突伸长表现出排斥作用的排斥性导向因子。脑信号蛋白抑制新生血管生成。脑信号蛋白控制骨重。另外，脑信号蛋白抑制瘙痒。脑信号蛋白对特应性皮炎有预防和治疗效果。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够排斥性地引导神经轴突伸长，抑制新生血管生成，控制骨重，抑制瘙痒，或者预防和治疗特应性皮炎。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自脑信号蛋白表达促进、神经轴突伸长抑制、血管生成抑制、骨重控制、瘙痒抑制、特应性皮炎预防和特应性皮炎治疗中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进神经生长因子(NGF)基因和神经生长因子受体(NGFR)的表达。神经生长因子促进神经的生长和维持，促进脑神经的功能恢复，对阿尔茨海默症和痴呆症的预防和治疗有效。神经生长因子介由神经生长因子受体来呈现作用。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够促进神经生长因子的表达，促进神经的生长和维持，促进脑神经的功能恢复，预防和治疗阿尔茨海默症和痴呆症。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自神经生长因子表达促进、神经生长和维持促进、脑神经功能恢复促进、阿尔茨海默症预防、阿尔茨海默症治疗、痴呆症预防和痴呆症治疗中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进核因子κB(NFκB)的抑制因子基因的表达。作为NFκB的抑制因子基因的例子，可举出NFKBIA基因。IκBα等NFκB的抑制因子抑制NFκB的活性，预防和治疗癌症。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够预防和治疗癌症。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自NFκB抑制因子表达促进、癌症预防和癌症治疗中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进作为钙蛋白酶(CAPN)抑制蛋白质的钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)基因的表达。在老化细胞中，CAPN活化，CAST消失。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够抑制老化。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂能够用作用于选自CAPN抑制蛋白质表达促进和抗老化功能提高中的用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进瓜氨酸化蛋白活化因子基因的表达。作为瓜氨酸化蛋白活化因子基因的例子，可举出肽酰基精氨酸脱亚氨酶3(PAD3)。PAD使瓜氨酸化蛋白活化，使正常的表皮的角化进行。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够使正常的皮肤的角化进行。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自瓜氨酸化蛋白活化因子表达促进和正常的皮肤的角化进行中的用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进转谷氨酰胺酶基因的表达。作为转谷氨酰胺酶基因的例子，可举出TGM1基因。转谷氨酰胺酶提高皮肤表面的物理强度，或者提高保湿功能。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够提高皮肤表面的强度，或者提高皮肤的保湿功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自转谷氨酰胺酶表达促进、皮肤表面强度提高、皮肤弹性提高和皮肤的保湿功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进内披蛋白(IVL)基因的表达。IVL促进角质化包膜的成熟，使皮肤的保湿功能提高。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够促进角质化包膜的成熟，使皮肤的保湿功能提高。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自IVL表达促进、角质化包膜成熟化促进和皮肤的保湿功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂促进水通道蛋白基因的表达。作为水通道蛋白基因的例子，可举出AQP3基因。水通道蛋白参与角质形成细胞的迁移，使皮肤的保湿功能提高。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够提高角质形成细胞迁移功能，提高皮肤的保湿功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如能够用作用于选自水通道蛋白表达促进、角质形成细胞迁移功能提高和皮肤的保湿功能提高中的至少一种用途的医药品、化妆品和/或食品。

另外，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂还具有减少真菌(霉菌)的功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如使真菌在24小时以内减少80％以上、85％以上、90％以上、或95％以上。作为真菌，可举出白癣菌、念珠菌、隐球菌和曲霉菌等，但不限定于这些。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂还具有真菌病的治疗效果。作为真菌病，可举出白癣、念珠菌并、隐球菌病和曲霉菌病等，但不限定于这些。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂还具有减少革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如使革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌在24小时以内减少80％以上、85％以上、90％以上或95％以上。作为革兰氏阴性菌，可举出大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌、肺炎杆菌和绿脓杆菌等，但不限定于这些。作为革兰氏阳性菌，可举出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)、形成芽孢的蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌等，但不限定于这些。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂还具有使病毒减少的功能。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如使病毒在24小时以内减少80％以上、85％以上、90％以上或95％以上。病毒包含作为具有包膜的病毒的包膜病毒和作为不具有包膜的病毒的非包膜病毒。另外，病毒包含DNA病毒和RNA病毒。

作为具有包膜的DNA病毒，可举出人疱疹病毒、牛痘病毒和乙型肝炎病毒等，但不限定于这些。

作为具有包膜的RNA病毒，可举出流感病毒、SARS冠状病毒、RS病毒、腮腺炎病毒、拉沙病毒、登革热病毒、风疹病毒、人类免疫缺陷病毒、麻疹病毒、丙型肝炎病毒、埃博拉病毒、黄热病毒和日本乙型脑炎病毒等，但不限定于这些。

作为不具有包膜的DNA病毒，可举出腺病毒、B19病毒、乳多泡病毒和人乳头瘤病毒等，但不限定于这些。

作为不具有包膜的RNA病毒，可举出诺罗病毒、脊髓灰质炎病毒、埃可病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、鼻病毒、星状病毒、轮状病毒、柯萨奇病毒、肠道病毒和札幌病毒等，但不限定于这些。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂包含有效量的乳杆菌属。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂可以在水等溶剂中包含乳杆菌属，也可以在植物的发酵液中包含乳杆菌属。作为用于得到发酵液的植物，与乳杆菌属同样地，可举出艾蒿和明日叶。

有效量是指为了起到基因表达调节效果所需的量，可根据作为对象的基因而适当地确定。一般而言，乳杆菌属的浓度高且溶剂包含植物的发酵液时，起到基因表达调节效果，但例如在对象基因为GBA基因的情况下，乳杆菌属的浓度低时，起到基因表达调节效果。另外，例如，在对象基因为TLR2基因的情况下，溶剂不含有植物的发酵液时，起到基因表达调节效果。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂中含有的乳杆菌属可以为活菌，也可以为例如经加热处理的死菌。因此，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂可以含有乳杆菌属的死菌。乳杆菌属可以为菌体干燥物。乳杆菌属的死菌或菌体干燥物也起到基因表达调节效果和抗菌抗病毒效果。另外，乳杆菌属的死菌或菌体干燥物容易运输、长期保管。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如可以为液体、霜、软膏、硬膏、凝胶、蜡和喷雾。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如可以为整肌用化妆品。作为整肌用化妆品的例子，可举出化妆水、美容液和面膜。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如可以为保护用化妆品。作为保护用化妆品的例子，可举出保护用乳液和保护用霜。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如可以为基底化妆品。作为基础化妆品的例子，可举出粉底、粉饼和妆前乳。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如可以为定妆(POINT MAKEUP)化妆品。作为定妆化妆品的例子，可举出口红、眼部化妆品、腮红和指甲油。

另外，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如以消毒药、涂布治疗药等皮肤外用药、滴眼剂和内服药的形式提供。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂例如可对包括手指和脚指的人体皮肤、毛发、口腔和眼球等给予。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂除乳杆菌属以外，还可以根据目的适当地含有液体油脂、固体油脂、蜡、烃、高级脂肪酸、高级醇、酯、有机硅、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子性表面活性剂、保湿剂、水溶性高分子、增稠剂、被膜剂、金属离子螯合剂、低级醇、多元醇、糖类、氨基酸类、有机胺类、pH调节剂、皮肤营养剂、维生素类、抗氧化剂、香料、粉体、着色材料和水等化妆品和医药品的配合成分。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂含有油性成分时，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂中的油性成分的浓度没有特别限定，例如为0.1质量％～90质量％或者0.5质量％～90质量％。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂含有水性成分时，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂中的水性成分的浓度没有特别限定，例如为0.1质量％～90质量％或者0.5质量％～90质量％。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂中的油性成分与水性成分的比可根据实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂为水包油(O/W)型或油包水(W/O)型而适当地设定。实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂含有表面活性剂时，实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂中的表面活性剂的浓度没有特别限定，例如为2质量％～10质量％。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂除乳杆菌属以外，还可以根据目的而适当地含有抗菌性物质或抗病毒性物质。

实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂可通过使植物发酵，得到包含乳杆菌属的发酵液来制造。使植物发酵时，可将盐和糖蜜等糖添加于植物。发酵温度例如为30℃。得到的发酵液的氢离子指数(pH)为4.0左右。可以从发酵液提取乳杆菌属的分泌物。

可以将得到的发酵液加热，使发酵液中含有的乳杆菌属变为死菌。另外，可以对发酵液进行喷雾干燥，得到乳杆菌属的菌体干燥物。菌体干燥物也可以通过冷冻干燥法和热风干燥法等来制作。

可以进一步将得到的发酵液、乳杆菌属的菌体或乳杆菌属的菌体干燥物添加于豆浆，使豆浆发酵而得到豆浆发酵液。豆浆发酵液也起到基因表达调节效果。

如上所述，本发明的各实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂等具有由上述任一个或多个的组合构成的以下的例子的构成和作用效果。

本实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品具备来自艾蒿或明日叶的乳杆菌(Lactobacillus)属。本实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品可以进一步具备来自艾蒿或明日叶的发酵液。医药品可以为抗皱用医药品或抗老化用医药品。化妆品可以为抗皱用化妆品或抗老化用化妆品。

本实施方式包含用于调节热休克蛋白基因表达的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属。本实施方式包含用于调节热休克蛋白基因表达的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属和来自艾蒿或明日叶的发酵液。

本实施方式包含来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属的用于制造热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品的应用。本实施方式包含来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属和来自艾蒿或明日叶的发酵液的用于制造热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品的应用。

本实施方式包含热休克蛋白基因表达的调节方法、治疗方法或美容方法，包括对人或非人动物给予来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属。本实施方式包含热休克蛋白基因表达的调节方法、治疗方法或美容方法，包括对人或非人动物给予来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属和来自艾蒿或明日叶的发酵液。治疗方法可以为用于提高抗皱功能的治疗方法或用于提高抗老化功能的治疗方法。美容方法可以为用于提高抗皱功能的美容方法或用于提高抗老化功能的美容方法。

热休克蛋白基因可以为选自HSPA1A基因和HSPB1基因中的至少一种。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进选自HSPA1A基因和HSPB1基因中的至少一种的表达。

本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属能够调节除热休克蛋白基因以外的基因的表达。由本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属调节表达的基因可以为选自神经酰胺酶基因、脂质合成酶基因、溶酶体水解酶基因、紧密连接生物合成因子基因和细胞间粘附因子基因中的至少一种。

神经酰胺酶基因可以为ASAH1基因。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以抑制ASAH1基因的表达。

脂质合成酶基因可以为DGAT1基因。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进DGAT1基因的表达。

溶酶体水解酶基因可以为GBA基因。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进GBA基因的表达。

紧密连接生物合成因子基因可以为选自CLDN1基因和OCLN基因中的至少一种。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进选自CLDN1基因和OCLN基因中的至少一种的表达。

细胞间粘附因子基因可以为选自ITGA2基因、CDH1基因和CD44基因中的至少一种。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进选自ITGA2基因、CDH1基因和CD44基因中的至少一种的表达。

由本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属调节表达的基因可以为抗微生物分子基因。抗微生物分子基因可以为选自TLR2基因、DEFB1基因、DEFB4A基因和DEFB103A基因中的至少一种。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进选自TLR2基因、DEFB1基因、DEFB4A基因和DEFB103A基因中的至少一种的表达。

由本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属调节表达的基因可以为选自瑟土因基因和端粒酶基因中的至少一种。

瑟土因基因为SIRT4基因。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进SIRT4基因的表达。

端粒酶基因可以为选自TERT基因和TERC基因中的至少一种。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进选自TERT基因和TERC基因中的至少一种的表达。

由本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属调节表达的基因可以为能量代谢因子基因。能量代谢因子基因可以为PPARGC1A基因。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进PPARGC1A基因的表达。

由本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属调节表达的基因可以为选自透明质酸生物合成因子基因和透明质酸分解因子基因中的至少一种。

透明质酸生物合成因子基因可以为选自HAS1基因、HAS2基因和HAS3基因中的至少一种。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进选自HAS1基因、HAS2基因和HAS3基因中的至少一种的表达。

透明质酸分解因子基因可以为选自HYAL2基因和CEMIP基因中的至少一种。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以抑制选自HYAL2基因和CEMIP基因中的至少一种的表达。

由本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属调节表达的基因可以为基底膜生物合成因子基因。基底膜生物合成因子基因可以为选自LAMA1基因、LAMA5基因、COL4A1基因和COL7A1基因中的至少一种。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以促进选自LAMA1基因、LAMA5基因、COL4A1基因和COL7A1基因中的至少一种的表达。

本实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品促进I型胶原的产生。本实施方式的I型胶原的产生促进剂具备来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属。本实施方式的I型胶原的产生促进剂具备来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属和来自艾蒿或明日叶的发酵液。

本实施方式包含用于促进I型胶原的产生的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属。本实施方式包含用于促进I型胶原的产生的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属和来自艾蒿或明日叶的发酵液。

本实施方式包含来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属的用于制造I型胶原的产生促进剂的应用。本实施方式包含来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属和来自艾蒿或明日叶的发酵液的用于制造I型胶原的产生促进剂的应用。

本实施方式包含I型胶原的产生的促进方法，包括对人或非人动物给予来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属。本实施方式包含I型胶原的产生的促进方法，包括对人或非人动物给予来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属和来自艾蒿或明日叶的发酵液。

本实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品促进HSP47的产生。本实施方式的HSP47的产生促进剂具备来自明日叶的乳杆菌属。本实施方式的HSP47的产生促进剂具备来自明日叶的乳杆菌属和来自明日叶的发酵液。

本实施方式包含用于促进HSP47的产生的来自明日叶的乳杆菌属。本实施方式包含用于促进HSP47的产生的来自明日叶的乳杆菌属和来自明日叶的发酵液。

本实施方式包含来自明日叶的乳杆菌属的用于制造HSP47的产生促进剂的应用。本实施方式包含来自明日叶的乳杆菌属和来自明日叶的发酵液的用于制造HSP47的产生促进剂的应用。

本实施方式包含HSP47的产生的促进方法，包括对人或非人动物给予来自明日叶的乳杆菌属。本实施方式包含HSP47的产生的促进方法，包括对人或非人动物给予来自明日叶的乳杆菌属和来自明日叶的发酵液。

本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属的种可以为选自parafarraginis种、parabuchneri种、buchneri种、harbinensis种、vini种和nagelii种中的至少一种。

本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以为死菌。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以进行加热处理。本实施方式的来自艾蒿或明日叶的乳杆菌属可以为菌体干燥物。

本实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品的制造方法包括由艾蒿或明日叶得到乳杆菌(Lactobacillus)属。本实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品的制造方法可以进一步包括将艾蒿或明日叶发酵而得到发酵液。本实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品的制造方法可以进一步包括使得到的乳杆菌属变为死菌。本实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品的制造方法可以进一步包括对得到的乳杆菌属进行加热处理。本实施方式的热休克蛋白基因表达调节剂、医药品或化妆品的制造方法可以进一步包括对得到的乳杆菌属进行干燥。

实施例

以下，对本发明的实施例进行说明。但是，本发明当然不限定于以下的实施例。

(实施例1：来自艾蒿的乳杆菌属)

在艾蒿叶中，一般认为一天中在日出时间的前后1小时合计2小时的期间，乳酸菌的数量达到最大。另外，一般认为在该时间段以外，乳酸菌减少，光合细菌增加。因此，在该2小时的期间，从艾蒿叶的前端采取约20cm的部分。将所采取的6.3kg的艾蒿叶立刻放入到其中铺有塑料袋的第1腌渍桶中，在艾蒿叶上撒上3.2kg的糖蜜和0.6kg的粗盐后，将塑料袋的口封闭并密封。从塑料袋的上方放置重石，腌制艾蒿叶。

在腌汁上升到艾蒿叶以上的几天后，取下重石。接下来，将用于冲洗的不含氯的10L的水放入到第2腌渍桶中，在水中放入艾蒿叶的腌浸物和10kg的腌汁。进一步准备第3腌渍桶，在第3腌渍桶的开口上放置金属网过滤器。从第2腌渍桶中一边用手搓洗一边一点一点地取出艾蒿叶，将艾蒿叶在第3腌渍桶的开口上的金属网过滤器上用手掌轻轻按压，压榨出腌汁。

将艾蒿叶完全压榨后，将残留于第2腌渍桶的腌汁通过金属网过滤器进行过滤。接下来，在第3腌渍桶中的腌汁溶入糖蜜(波照间黑糖)使其最终浓度为10重量％，并且溶入粗盐使其最终浓度为3重量％。其后，通过使第3腌渍桶的周围温度约为30℃而开始发酵。最初确认到大气泡的发泡，逐渐变为小气泡的发泡，最后发泡结束。约1周后，发泡结束时的pH为3.8左右。将此时的腌汁作为艾蒿发酵液。将得到的艾蒿发酵液的一部分在70℃加热30分钟，得到杀死细菌后的热处理艾蒿发酵液。

用下一代测序仪(MiSeq，Illumina公司)对未进行热处理的艾蒿发酵液进行解析，结果如图1所示，艾蒿发酵液包含乳杆菌属的parafarraginis种、parabuchneri种、buchneri种和harbinensis种等。应予说明，下一代测序仪也被称为高吞吐量测序仪。另外，图1的表中的数值反映了艾蒿发酵液中含有的菌种的菌数。

(实施例2：来自明日叶的乳杆菌属)

在明日叶中，一般认为在一天中的日出时间的前后1小时合计2小时的期间，乳酸菌的数量达到最大。另外，一般认为在该时间段以外，乳酸菌减少，光合细菌增加。因此，在该2小时的期间，采取明日叶的新芽的茎叶。将所采取的6.3kg的明日叶立刻放入到其中铺有塑料袋的第1腌渍桶中，在明日叶上撒上3.2kg的糖蜜和0.6kg的粗盐后，将塑料袋的口封闭并密封。从塑料袋的上方放置重石，腌制明日叶。

在腌汁上升到明日叶以上的几天后，取下重石。接下来，将用于冲洗的不含氯的10L的水放入到第2腌渍桶中，在水中放入明日叶的腌渍物和10kg的腌汁。进一步准备第3腌渍桶，在第3腌渍桶的开口上放置金属网过滤器。从第2腌渍桶中一边用手搓洗一点一点地取出明日叶，将明日叶在第3腌渍桶的开口上的金属网过滤器上用手掌轻轻按压，压榨出腌汁。

将明日叶完全压榨后，将残留于第2腌渍桶的腌汁通过金属网过滤器进行过滤。接下来，在第3腌渍桶中的腌汁溶入糖蜜使其最终浓度为10重量％，并且溶入粗盐使其最终浓度为3重量％。其后，通过使第3腌渍桶的周围温度约为30℃而开始发酵。最初确认到大气泡的发泡，逐渐变为小气泡的发泡，最后发泡结束。约1周后，发泡结束时的pH为4.0左右。将此时的腌汁作为明日叶发酵液。将得到的明日叶发酵液的一部分在70℃加热30分钟，得到杀死细菌后的热处理明日叶发酵液。

用下一代测序仪(MiSeq，Illumina公司)对未进行热处理的明日叶发酵液进行解析，结果如图2所示，明日叶发酵液包含vini种和nagelii种等。应予说明，图2的表中的数值反映了明日叶发酵液中含有的菌种的菌数。

(实施例3：使用乳杆菌属的豆浆发酵液)

将豆浆加热到70℃，进行约30分钟加热灭菌处理。在加热灭菌处理后的豆浆中加入实施例1中准备的未进行热处理的艾蒿发酵液使其最终浓度约为10wt％，进行充分搅拌。其后，使添加有未进行热处理的艾蒿发酵液的豆浆在37℃发酵24小时。发酵后，通过过滤而除去固体成分，得到包含乳杆菌属的豆浆发酵液。

(实施例4：基因表达检查)

从实施例1中得到的艾蒿发酵液中分离出活乳杆菌属，使其以0.05g/L的浓度分散于纯水，作为样品1。另外，使分离出的活乳杆菌属以5.0g/L的浓度分散于纯水，作为样品2。将以5.0g/L的浓度包含活乳杆菌属的艾蒿发酵液作为样品3。

使用增殖培养基(Growth Medium：18SGM 082，EPISKIN公司)，将三维培养表皮模型(SkinEtchic RHE：18RHE 098，EPISKIN公司)驯化过夜。接着，将三维培养表皮模型转移到分注有增殖培养基的6孔板的Transwell小室(康宁)中，对孔内的三维培养表皮模型的角质层侧应用50μL的样品1～3中的任一者。24小时后，从孔中除去添加了样品的培养基，用不含有钙和镁的磷酸缓冲盐水(PBS(－))清洗三维培养表皮模型。

用手术刀从Transwell小室中连同膜一起切取三维培养表皮模型，使三维培养表皮模型浸渍于裂解液(QIAzol，注册商标，QIAGEN)后，使用破碎装置(Tissue Lyser，QIAGEN)将细胞破碎而得到破碎液。使用RNA纯化试剂盒(miRNeasy Mini Kit，注册商标，QIAGEN)从破碎液中纯化RNA，回收纯化的RNA。将回收的RNA送至提供委托解析服务的三菱化学株式会社，使用mRNA表达解析芯片对样品中经处理的细胞中的基因表达进行解析。样品中未经处理的细胞(对照)中的基因表达标准化为1.00，算出样品中经处理的细胞中的基因表达与对照中的基因表达的比。另外，使用Student t检验进行显著性差异检验。

将结果示于图3～图8。大于1.00的值表示与对照相比基因表达得到促进。小于1.00的值表示与对照相比基因表达得到抑制。

(实施例5：抗皱效果)

将以5.0g/L的浓度包含实施例1中准备的乳杆菌属的艾蒿发酵液在5个月间每天2次涂布于46岁女性的脸颊。其结果，如图9所示，确认了随着老化的皱纹的减少。应予说明，没有确认到炎症反应和晒黑等。以5.0g/L的浓度包含实施例1中准备的乳杆菌属的艾蒿发酵液如实施例4所示，HSP70基因的表达促进效果极高，因此认为HSP70的抗炎效果和美白效果超过炎症相关基因和晒黑相关基因的表达促进效果。

(实施例6：乳杆菌属的抗菌效果)

准备作为革兰氏阳性球菌的金黄色葡萄球菌和MRSA，准备作为革兰氏阳性杆菌的枯草芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌，准备作为革兰氏阴性球菌的大肠杆菌、沙门氏菌、副溶血弧菌和肺炎杆菌，准备作为革兰氏阴性杆菌的绿脓杆菌。

将以10

(实施例7：乳杆菌属的抗真菌效果)

作为真菌，准备白癣菌和念珠菌。将以10

(实施例8：乳杆菌属的抗病毒效果)

作为包膜病毒，准备甲型流感病毒(H1N1)的培养液。另外，作为非包膜病毒，准备诺罗病毒(猫杯状病毒)的培养液。病毒的培养液用纯化水按照每次10倍进行阶段稀释。然后，按照50％组织培养感染量(TCID50：50％Tissue Culture Infectious Dose)，在室温下实施利用实施例3中准备的包含乳杆菌属的豆浆发酵液的抗病毒试验。抗病毒试验在日本食品分析中心实施。

其结果，如图12所示，包含乳杆菌属的豆浆发酵液在1小时以内使流感病毒的感染滴度减小。另外，如图13所示，包含乳杆菌属的豆浆发酵液在24小时以内使诺罗病毒的感染滴度减小。

(实施例9：乳杆菌属的抗白癣菌效果)

对实施例1中得到的未进行热处理的艾蒿发酵液进行喷雾干燥，得到乳杆菌属的干燥菌体。以菌体干燥物成为10重量份的方式将得到的菌体干燥物悬浮于水和甘油中，得到实施例9的乳杆菌属的悬浮液。将乳杆菌属的悬浮液添加到白癣菌中，测量白癣菌的菌落形成单位(CFU)，结果，如图14所示，乳杆菌属的悬浮液在24小时以内杀灭了白癣菌。

(实施例10：乳杆菌属的I型胶原和HSP47产生促进效果)

使用DMEM培养基(+5％FBS)在培养器中维持正常人真皮成纤维细胞直至达到融合状态。达到融合后，从培养器中除去培养基，将含有600μmol/L的过氧化氢(H

利用作为老化标志物的衰老相关β-半乳糖苷酶(SA－β－Gal)染色来确认细胞被老化诱导。

使用DMEM培养基(+5％FBS)将老化诱导处理细胞以5.0×10

利用ELISA法(使用Anti－Human Collagen Type I抗体(Rabbit)的直接法)对回收的培养基中的I型胶原量进行定量。其结果，如图15所示，显示用包含维生素C磷酸镁或维生素C的培养基(阳性对照)培养细胞时，促进了I型胶原的产生。另外，显示用分别添加了艾蒿发酵液和明日叶发酵液的培养基培养细胞时，也促进了I型胶原的产生。

另外，使用市售的ELISA试剂盒(abcam)对细胞裂解液的上清液中的HSP47进行定量。其结果，如图16所示，显示用添加了明日叶发酵液的培养基培养细胞时，促进了HSP47的产生。

(实施例11：乳杆菌属的抗老化效果)

使用DMEM培养基(+5％FBS)将正常人真皮成纤维细胞以5.0×10

除去各孔的培养基，将含有600μmol/L的过氧化氢(H

然后，向孔中分别添加含有1.0％的以5.0g/L的浓度包含实施例1中准备的乳杆菌属的艾蒿发酵液的DMEM培养基(+10％FBS)、含有1.0％的以5.0g/L的浓度包含实施例2中准备的乳杆菌属的明日叶发酵液的DMEM培养基(+10％FBS)、作为阳性对照的含有10μmol/L的具有抗氧化作用的白藜芦醇的DMEM培养基(+10％FBS)和作为阴性对照的DMEM培养基(+10％FBS)，将细胞培养3天。

然后，将在各自的条件下培养的细胞以5.0×10

其结果，如图17、图18和图19所示，仅被老化诱导的细胞的SA－β－Gal染色的程度强。与此相对，被老化诱导且用艾蒿发酵液或明日叶发酵液进行处理后的细胞与被老化诱导且用白藜芦醇进行处理后的细胞同样地，使SA－β－Gal染色的程度减少。因此，表明艾蒿发酵液和明日叶发酵液具有抗老化作用。

(实施例12：乳杆菌属的HSP70产生促进效果)

将三维培养表皮模型(SkinEthic RHE：19RHE 008，EPISKIN公司)用增殖培养基(Growth Medium：19SGM 005，EPISKIN公司)驯化过夜。驯化后，将表皮模型转移到分注有1mL增殖培养基的6孔板中，对表皮模型的角质层侧分别应用以5.0g/L的浓度包含实施例1中准备的乳杆菌属的艾蒿发酵液50μL和以5.0g/L的浓度包含实施例2中准备的乳杆菌属的明日叶发酵液50μL。

将表皮模型培养24小时后，除去发酵液，将表皮模型用PBS(－)清洗。使用阿尔玛蓝法对表皮模型的存活率进行评价。将含有10％阿尔玛蓝试剂(alamarBlue CellViability Reagent，注册商标，Invitrogen公司)的维持培养基分注到24孔板中。将表皮模型转移到培养板中，培养2小时后，测定培养上清液的荧光强度。细胞存活率作为相对于应用PBS(－)代替发酵液的对照组的荧光强度的指数(％)而算出。得到的结果使用Student t检验进行显著性差异检验。其结果，如图20所示，未确认到因应用艾蒿发酵液或明日叶发酵液所带来的细胞存活率的显著降低。

测定荧光强度后，将表皮模型浸渍于PBS，使用样品破碎装置(Tissue Lyser)将表皮模型破碎。将细胞裂解液以15000rpm进行离心分离，回收上清液。使用市售的ELISA试剂盒(Enzolifesciences)对回收溶液中的HSP70进行定量。得到的结果使用Student t检验而进行显著性差异检验。其结果，如图21所示：通过应用艾蒿发酵液或明日叶发酵液，HSP70的产生量显著增加。

以上说明的各实施方式和实施例是为了容易理解本发明，而不是为了限定性地解释本发明。本发明可以在不脱离其主旨的情况下进行变更/改进，并且其等同物也包含在本发明中。即，本领域技术人员对各实施方式和实施例适当地加以设计变更的方式只要具备本发明的特征，则也包含在本发明的范围中。例如，各实施方式和实施例所具备的各要素等并不限定于例示的内容，可以进行适当的变更。另外，各实施方式和实施例为例示，当然可以对不同实施方式中示出的构成进行部分替换或组合，它们只要包含本发明的特征，则也包含在本发明的范围中。