结核分枝杆菌热休克蛋白Hsp60编码基因的克隆与原核表达

摘要

一、目的 热休克蛋白(heatshockprotein,Hsp)属于广泛存在于自然界中高度保守的蛋白质家族，在热应激下它们大量表达，因此称为热休克蛋白。热休克蛋白表达量的提高与许多应激条件有关，如低氧、营养缺乏、病毒感染、吞噬和转化作用。结核分枝杆菌是结核病病原菌。结核分枝杆菌基因组携带有两组GroEL基因，GroEL1和GroEL2。它们分别编码热休克蛋白60(cpn60.1)和热休克蛋白65(cpn60.2)。当机体感染结核分枝杆菌时，结核杆菌热休克蛋白60显示较强的疫原性，可诱导较强的B细胞和T细胞免疫应答。因此我们克隆结核分枝杆菌热休克蛋白60(Hsp60)编码基因，并在大肠杆菌中表达，为进一步纯化和研究该蛋白的免疫学特性奠定基础。 二、方法 利用PCR技术从结核杆菌H37Rv株中扩增hsp60基因，并将其与pZero-T载体连接，进行DNA测序。用EcoRI+XbaI双酶切，从TBhsp60-pZero-T质粒上切下hsp60基因，然后将该片段插入同样经过双酶切的E.coli表达载体pProEXHTb中。构建重组原核表达质粒pProEXHTb-TBhsp60。并将pProEXHTb-TBhsp60重组原核表达质粒转化入不同的E.coli菌株(BL21，DH5α，JM109)，用不同摩尔浓度的IPTG诱导表达。 三、结果 成功地克隆了结核分枝杆菌hsp60基因。DNA测序证实，与GenBank公布的序列一致。含pProEXHTb-TBhsp60基因表达质粒的大肠杆菌经IPTG诱导后，能够高效表达相对分子质量(KD)约为60KD的融合蛋白。 四、结论 获得了结核分枝杆菌hsp60基因，成功地构建了原核表达质粒pProEXHTb-TBhsp60，并在大肠杆菌得到表达，结果显示重组质粒在E.coliBL21中表达时表达量最大，并随时间的增加表达量也增加，但蛋白的表达不受IPTG浓度的影响。为大量获得HSP60蛋白和研究其免疫学特性奠定了基础。

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英文缩写词表

摘要

前言

第一部分 结核分枝杆菌热休克蛋白60编码基因的克隆及序列分析

第二部分 结核分枝杆菌热休克蛋白60的原核表达及鉴定

讨论

小结

参考文献

综述 结核分枝杆菌Hsp60家族研究进展

致谢