IPO8基因启动子的克隆及转录活性分析

摘要

目的:克隆IPO8基因5'端非编码序列,探讨其转录活性.方法:应用cDNA 5'末端快速扩增(rapidamplification ofcDNA ends,5'RACE)方法定立IPO8基因转录起始点;在此基础上针对其5'端非编码区包括转录起始点在内的-3302 ～ +134区域分段进行PCR扩增,将产物克隆入荧光素酶表达载体pGL3-Basic.经酶切鉴定后,将重组质粒与内参质粒pRL-T K共转染人骨肉瘤细胞Saos-2,用双荧光素酶活性检测以确定其转录活性.结果:成功确定IPO8基因转录起始位点,酶切结果证实IPO8基因5'端非编码区6条续减片段正确插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic.重组质粒转染Saos-2细胞后检测到荧光素酶的高表达(P＜0.05).结论:成功构建具有转录活性的IPO8启动子片段,为进一步研究IPO8表达调控机制奠定了基础.