秦川牛CROT基因启动子活性分析及转录调控元件分析

摘要

旨在筛选调控秦川牛肉碱O辛基转移酶基因(CROT)的启动子活性区域及转录因子,为研究该基因的表达调控机制提供理论依据.本研究根据NCBI数据库已公布的牛CROT基因的5'侧翼区序列,以秦川牛外周血基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增CROT基因启动子区序列;利用在线软件分析启动子区域中可能存在的转录因子结合位点,根据分析结果设计引物,进而构建启动子区8个不同缺失片段的pGL3-CROT双荧光素酶表达载体,分别转染3T3L1细胞系,通过双荧光素酶检测系统检测启动子活性,寻找启动子转录调控核心区域:利用在线软件预测CROT基因核心启动子区的转录因子结合位点,结合预测结果构建突变载体利用双荧光素酶检测系统检测活性.结果表明,本研究成功克隆得到秦川牛CROT基因启动子序列1986bp,成功构建了8个不同长度的启动子片段,初步确定该基因启动子转录调控核心区域位于-485/-263.