人骨形成蛋白2基因克隆及真核表达载体的构建

摘要

在大肠杆菌中克隆人骨形成蛋白2基因并获得真核表达载体.由人成骨瘤细胞中提取总RNA,利用逆转录PCR方法扩增获得人骨形成蛋白2基因cDNA;将此基因片段重组到pGEM-T克隆载体中,转化到大肠杆菌DH5α后, 蓝白斑筛选阳性克隆,利用限制性酶切、PCR扩增和核苷酸序列分析鉴定重组质粒; 将pGEM-T克隆载体中人骨形成蛋白2基因重组到pcDNA3.1真核表达载体中,用限制性酶切和PCR扩增鉴定重组质粒.结果表明:重组在两种质粒中的基因片段为人骨形成蛋白2基因全编码序列.克隆获得人骨形成蛋白2基因,并得到此基因的真核表达载体,为人骨形成蛋白2的表达打下了基础.