猪小肠黏膜下层脱细胞基质中I、Ⅲ型胶原检测方法研究

摘要

猪小肠黏膜下层脱细胞基质(SIS,Small intestinal submucosa)的主要成分为I、III型胶原,拟建立一种基于液相质谱联用(HPLC-MS)的胶原类型识别和定量检测方法.首先利用胰蛋白酶将胶原标准品和样品酶解,利用离子阱质谱(Ion trap mass spectrometry,LCQ)识别出I、III型胶原的特征多肽分别为GETGPAGPAGPVGPVGAR、GP-PGAVGPSGPR,再利用三重四极杆质谱(Triple quadrupole mass spectrometry,TSQ)对其进行定量;然后通过胶原标准品浓度和峰面积的线性关系计算I、III型胶原的含量.结果 表明VIDASISTM和Biodesign?中I、III型胶原的含量总和与高效液相色谱法检测结果一致,通过HPLC-MS检测猪跟腱和真皮中I、III型胶原含量的结果符合其在组织中的分布规律;方法学实验表明HPLC-MS的精密度(RSD=2.38％)较高、稳定性良好.