脱细胞基质

摘要： 目的以新西兰白兔构建硬脑膜缺损模型,通过观察使用国产猪小肠黏膜下层脱细胞基质补片后动物的生理状态、临床表现以及病理组织学改变,评价可降解补片修复硬脑膜缺损的有效性和安全性。方法用48只新西兰白兔制作硬脑膜缺损模型,并随机分为试验组和对照组,每组24只,分别植入国产的猪小肠黏膜下层脱细胞基质补片(供试品)和国外市售的生物硬脑膜修补片(对照品),然后观察术后两组动物的基本情况。植入术后7 d、30 d、60 d、90 d共4个时间点分别检测兔血液学及血生化指标变化,然后安乐死动物,解剖观察硬脑膜修复情况,并取硬脑膜创伤组织进行病理组织学分析。实验期间,对所有动物进行兽医临床观察。结果试验组和对照品组兔均能在术后30 d硬脑膜外口愈合,两组动物临床行为学观察无明显异常,存活率也无差异。此外,植入术后各时间节点的兔血液学及生化指标均无明显变化(P>0.05),且解剖动物后观察证实两组间硬脑膜修复过程无明显差别,病理组织学检查也未见感染性炎性反应。结论用猪小肠黏膜下层脱细胞基质修复兔硬脑膜,与市售材料相比,具有类似的硬脑膜修复疗效与防脑脊液渗漏效果,证明了其安全性和有效性。

摘要： 人体内组织缺损修复补片材料一直是材料工程和生物医学工程的研究重点之一,人工合成高分子补片因具有物理力学性能好、可塑性强、价格低廉等优点在临床上得到了广泛的应用。但人工合成高分子补片材料普遍存在生物相容性较差、诱导组织再生能力不佳、并发症较多等问题,难以达到人体缺损组织理想修复材料的临床要求,因而,人们将研究的触角伸向了生物源性的补片材料。相比于合成高分子补片,生物源性补片具有更好的生物相容性和更低的免疫原性,在应用中能够很好地与宿主组织整合并诱导新生组织的再生,且并发症较少。但单一的生物源性补片材料在实际应用中仍存在力学强度不够、降解速率过快等问题。为了解决这些问题,研究者们或采用物理和化学方法对生物源性补片材料进行改性,如采用化学交联剂对补片进行交联固定;或对补片结构进行仿生学设计,采用不同的补片成型方法,如静电纺丝等方法优化补片结构;或将多种补片材料复合等,以最大限度地提高补片的物理力学性能、耐降解性能和生物学性能,进而获得更为理想的生物源性补片。本文重点综述了生物源性补片的最新研究进展,介绍了近年来生物源性补片在腹部、心肌、盆腔以及尿道缺损等领域的应用现状,并对其发展前景进行了展望。

摘要： 在前期同种异体脱细胞真皮基质的研究基础上,对脱细胞真皮基质作为填充物治疗压疮的生物特性进行了研究。采用γ射线灭菌人体皮肤,质量分数0.05%Trypsin酶/EDTA处理制备真皮脱细胞基质,并观察真皮基质微观结构等物理特性变化;苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察基质脱细胞效果;把稳定表达荧光Lifeact的细胞接种到真皮基质表面上观察细胞的黏附行为,把人体成纤维细胞(human fibroblasts,HFB)接种到基质真皮表面,使用CCK-8检测基质对细胞生长的毒性,采用DAPI染色观察细胞在基质中的长入情况。实验结果显示:脱细胞真皮基质微观结构与正常皮肤相似,基质的压缩弹性模量为(12.59±5.50)MPa,与对照组材料(6.75±2.20)MPa比较,差异无统计学意义(P>0.05);孔隙率与表观密度均适于细胞长入基质内部;HE染色发现细胞脱除效果良好,基质中无明显可见的细胞及细胞碎片;HFB与基质共培养1 d、4 d、7 d后和仅HFB与培养液组相比,发现基质对HFB生长无影响,表明基质无细胞毒性;共培养3 d细胞数不断增加,9 d可见DAPI染色的HFB向基质厚度方向长入,HFB充满厚度方向。皮肤组织经过γ射线灭菌、质量分数0.05%Trypsin酶/EDTA处理后的脱细胞真皮基质作为组织填充物是治疗压疮可靠的修复手段,值得临床推广。

摘要： 组织器官脱细胞后制备成的脱细胞基质(Decellularized extracellular matrix,dECM)含有许多蛋白质和生长因子,不仅能够为细胞提供三维支架还能够调控细胞再生,是目前最具有生物结构的生物材料.3D生物打印可以层层打印dECM和自体细胞的组合,构建载细胞组织结构.文中综述了不同来源的组织器官脱细胞基质生物墨水制备方法,包括脱细胞、交联等,以及脱细胞基质生物墨水在生物打印中的应用,并展望了其未来的应用前景.

摘要： 目的:探究同种(人皮)脱细胞基质、异种(牛皮)脱细胞基质、纳米纤维丝素蛋白三种材料修复大鼠口腔黏膜缺损创面的效果.方法:选择80只3月龄雄性Wister清洁级大鼠,随机分为A(纳米纤维丝素组,n=20)、B(牛皮脱细胞基质组,n=20)、C(人皮脱细胞基质组,n=20)、D组(空白对照组,n=20),各组大鼠均切除直径10mm的全层口腔颊黏膜,A、B、C组大鼠分别取同一直径、经辐照灭菌的纳米纤维丝素蛋白、异种(牛皮)脱细胞基质、同种(人皮)脱细胞基质覆盖于创面,D组大鼠用凡士林纱布覆盖,比较各组大鼠术后1、2、3、4周时创面面积,采用HE染色及免疫组化分析大鼠各时间点成纤维细胞、新生血管内皮、炎性细胞数量及内皮细胞生长情况.结果:①各组大鼠术后创面无感染,术后1周A、B、C组受植区可见透明膜状物,D组创缘稍红肿,术后1、2、3周时D组大鼠创面直径显著大于A、B、C组(P0.05).②HE染色显示,A、B、C组大鼠不同时间点成纤维细胞数、炎性细胞数均显著低于D组(P0.05).③免疫组化示,A、B、C组术后1、2、3、4周时大鼠CK阳性细胞表达数显著高于D组(P0.05).结论:纳米纤维丝素蛋白、自体、异体细胞基质对大鼠口腔黏膜损伤具有相似的修复效果,有较高的临床应用价值.

摘要： 细胞外基质材料是通过组织或器官脱细胞化获得,其不仅能为再生的组织细胞提供三维支架结构,还具有调控再生细胞行为(包括细胞形态、黏附、增殖、迁移、分化及凋亡)、诱导干细胞增殖和分化及通过机械感知或受体介导调控细胞信号通路和基因表达等作用,也因其具有的这些良好的特性,近年来细胞外基质越来越广泛地被应用于组织再生修复中.该文通过广泛检索脱细胞基质材料用于组织再生修复的相关文献,对脱细胞基质材料促进组织再生修复中的作用及其应用进行分析总结.

摘要： 猪小肠黏膜下层脱细胞基质(SIS,Small intestinal submucosa)的主要成分为I、III型胶原,拟建立一种基于液相质谱联用(HPLC-MS)的胶原类型识别和定量检测方法.首先利用胰蛋白酶将胶原标准品和样品酶解,利用离子阱质谱(Ion trap mass spectrometry,LCQ)识别出I、III型胶原的特征多肽分别为GETGPAGPAGPVGPVGAR、GP-PGAVGPSGPR,再利用三重四极杆质谱(Triple quadrupole mass spectrometry,TSQ)对其进行定量;然后通过胶原标准品浓度和峰面积的线性关系计算I、III型胶原的含量.结果 表明VIDASISTM和Biodesign?中I、III型胶原的含量总和与高效液相色谱法检测结果一致,通过HPLC-MS检测猪跟腱和真皮中I、III型胶原含量的结果符合其在组织中的分布规律;方法学实验表明HPLC-MS的精密度(RSD=2.38％)较高、稳定性良好.

摘要： 脱细胞基质是最接近机体组织生理结构和功能的仿生支架材料,也是目前最为理想的细胞微环境.目前常用的脱细胞基质材料均为陆地哺乳动物来源,其有效性已得到临床认可,但其病毒传播风险也引发了普遍关注.本研究探讨制备水生动物源性脱细胞基质材料,不仅可有效降低陆地动物源性材料的生物安全性问题,而且可规避部分地区的宗教伦理问题,为转化医学新产品的开发提供了新思路.

摘要： 本文对应用软骨脱细胞基质修复软骨缺损进行了研究.结果表明,脱细胞软骨可以诱导软骨膜细胞向其中生长而重建软骨,因此脱细胞软骨有可能是复合生长因子.经过适当的处理可以作研究软骨组织工程学的支架材料.

摘要： 目的：探讨以人VEGF-Hep-DAT支架材料构建血管化组织工程化脂肪的可行性. 方法：取腹部取皮术后的剩余人脂肪组织,经改良冻融法制备DAT,在DAT支架表面接枝肝素分子,利用肝素和生长因子间 的静电吸附作用,将VEGF负载到DAT上,构建VEGF-Hep-DAT支架.将支架材料与hBMSC进行复合培养,并检测移植物血管化水平. 结果：所制备的DAT无细胞残留且保持较完整的细胞外基质成分,Hep-DAT能够显著地吸收VEGF,并且在体外可持续释放,VEGF-Hep-DATs可诱导hBMSCs内皮细胞分化,并刺激血管内皮标志物CD34、vwf的表达;体内移植可构建血管化良好的组织工程脂肪组织. 结论：VEGF-Hep-DAT支架可持续释放VEGF,联合hBMSC在体内能够成功构建血管化的脂肪组织,可作为一种理想的组织工程支架.

摘要： 近年来,利用天然软骨脱细胞基质构建的组织工程软骨支架显示出了较好的软骨缺损修复效果,但其供体来源有限,无法大面积使用.通过干细胞体外诱导培养形成的类软骨脱细胞基质可望产生相近的软骨诱导效果,从而提供一种易得的组织工程软骨支架.本研究利用间充质干细胞-胶原微球制备技术，在体外快速制备了不同发育阶段（早期、中期和后期）的微米级仿生类软骨，并研究了其脱细胞基质对骨髓间充质干细胞分化的影响。

摘要： 目的：探讨应用体外培养的犬食管黏膜上皮细胞种植于猪的主动脉脱细胞基质支架上，构建组织工程化人工食管的可行性。方法：用酶-去污剂法对犬主动脉进行脱细胞处理，体外分离、培养、扩增新生家犬的食管黏膜上皮细胞，接种于去细胞基质支架体外培养，通过组织学及电镜观察是管黏膜上皮细胞在脱细胞基质支架上的生长情况。结果：酶化学除垢剂法能使猪主动脉细胞脱落，基质三维结构变疏松。体外扩增的犬食管黏膜上皮细胞可以种植在脱细胞基质上并能生长，增殖。结论：脱细胞的基质与犬食管上皮细胞具有良好的生物相容性，能结合在一起并形成人工食管移植体。

摘要： 本文实验拟在体外构建一种具有良好生物相容性及可塑形的组织工程化软骨.结果表明:塑成的圆柱形软骨细胞-异体软骨微粒细胞基质-纤维蛋白胶复合物可于体外形成软骨组织,可进一步应用于体内修复关节软骨缺损.

摘要： 国际生物材料学会联合会主席张兴栋院士在国际率先提出并确证无生命的多孔磷酸钙陶瓷可具有生物活性物质特有的诱导骨再生的作用,提出“组织诱导性生物材料(Tissue Inducing Biomaterials)”,即通过材料自身因素的控制和优化设计,而不是外加活体细胞或生长因子,可赋予材料诱导组织形成或再生的生物功能,开拓了生物材料发展的新途径.

摘要： 目的:近期研究表明,来源于脱细胞组织的生物材料对于干细胞的生长和分化具有特殊作用.本研究拟通过去除纤维环组织中的细胞而获取脱细胞纤维环基质材料,并研究其对骨髓间充质干细胞(BMSC)的生长和分化潜能的影响.rn 方法:将猪纤维环组织剪碎,先后以0.25％的胰酶、含50 U/ml DNase和1 U/ml RNase的Tris-HCl溶液消化并经1％ Triton X-100处理后,将所得脱细胞的纤维环基质用3％醋酸溶解.将溶液制膜,通过DAPI染色观察脱细胞效果.将兔BMSC分别接种到普通培养板和脱细胞纤维环基质膜上,检测BMSC在培养板和膜上的增殖能力.通过成脂、成骨、成软骨诱导分化实验检测细胞的分化潜能.rn 结果:脱细胞纤维环基质膜经DAPI染色呈阴性，表明纤维环组织里的细胞己被彻底去除。MTT结果显示，BMSC在膜上的生长速度比在普通培养板上更快，表明脱细胞纤维环基质有利于BMSC增殖。细胞在培养板和膜上经过成脂、成骨、成软骨诱导分化后，通过Oil Red O, Alizarin Red, Safranin O染色显示在膜上生长的细胞形成的脂滴、钙结节、软骨基质较培养板上的明显增多，说明脱细胞纤维环基质能较好维持BMSC的多向分化潜能。rn 结论:种子细胞、支架材料、生长因子是组织工程必不可少的三要素。本研究所获得的脱细胞纤维环组织里含有大量有利于细胞生长的细胞外基质。通过比较BMSC在普通培养板和脱细胞纤维环基质上的生长和分化潜能，证明脱细胞纤维环基质有助于干细胞的生长并维持干细胞的多向分化潜能。这种材料将在纤维环组织工程研究中具有重要意义。

摘要： 目的:近期研究表明,来源于脱细胞组织的生物材料对于干细胞的生长和分化具有特殊作用.本研究拟通过去除纤维环组织中的细胞而获取脱细胞纤维环基质材料,并研究其对骨髓间充质干细胞(BMSC)的生长和分化潜能的影响.rn 方法:将猪纤维环组织剪碎,先后以0.25％的胰酶、含50 U/ml DNase和1 U/ml RNase的Tris-HCl溶液消化并经1％ Triton X-100处理后,将所得脱细胞的纤维环基质用3％醋酸溶解.将溶液制膜,通过DAPI染色观察脱细胞效果.将兔BMSC分别接种到普通培养板和脱细胞纤维环基质膜上,检测BMSC在培养板和膜上的增殖能力.通过成脂、成骨、成软骨诱导分化实验检测细胞的分化潜能.rn 结果:脱细胞纤维环基质膜经DAPI染色呈阴性，表明纤维环组织里的细胞己被彻底去除。MTT结果显示，BMSC在膜上的生长速度比在普通培养板上更快，表明脱细胞纤维环基质有利于BMSC增殖。细胞在培养板和膜上经过成脂、成骨、成软骨诱导分化后，通过Oil Red O, Alizarin Red, Safranin O染色显示在膜上生长的细胞形成的脂滴、钙结节、软骨基质较培养板上的明显增多，说明脱细胞纤维环基质能较好维持BMSC的多向分化潜能。rn 结论:种子细胞、支架材料、生长因子是组织工程必不可少的三要素。本研究所获得的脱细胞纤维环组织里含有大量有利于细胞生长的细胞外基质。通过比较BMSC在普通培养板和脱细胞纤维环基质上的生长和分化潜能，证明脱细胞纤维环基质有助于干细胞的生长并维持干细胞的多向分化潜能。这种材料将在纤维环组织工程研究中具有重要意义。

摘要： 目的:近期研究表明,来源于脱细胞组织的生物材料对于干细胞的生长和分化具有特殊作用.本研究拟通过去除纤维环组织中的细胞而获取脱细胞纤维环基质材料,并研究其对骨髓间充质干细胞(BMSC)的生长和分化潜能的影响.rn 方法:将猪纤维环组织剪碎,先后以0.25％的胰酶、含50 U/ml DNase和1 U/ml RNase的Tris-HCl溶液消化并经1％ Triton X-100处理后,将所得脱细胞的纤维环基质用3％醋酸溶解.将溶液制膜,通过DAPI染色观察脱细胞效果.将兔BMSC分别接种到普通培养板和脱细胞纤维环基质膜上,检测BMSC在培养板和膜上的增殖能力.通过成脂、成骨、成软骨诱导分化实验检测细胞的分化潜能.rn 结果:脱细胞纤维环基质膜经DAPI染色呈阴性，表明纤维环组织里的细胞己被彻底去除。MTT结果显示，BMSC在膜上的生长速度比在普通培养板上更快，表明脱细胞纤维环基质有利于BMSC增殖。细胞在培养板和膜上经过成脂、成骨、成软骨诱导分化后，通过Oil Red O, Alizarin Red, Safranin O染色显示在膜上生长的细胞形成的脂滴、钙结节、软骨基质较培养板上的明显增多，说明脱细胞纤维环基质能较好维持BMSC的多向分化潜能。rn 结论:种子细胞、支架材料、生长因子是组织工程必不可少的三要素。本研究所获得的脱细胞纤维环组织里含有大量有利于细胞生长的细胞外基质。通过比较BMSC在普通培养板和脱细胞纤维环基质上的生长和分化潜能，证明脱细胞纤维环基质有助于干细胞的生长并维持干细胞的多向分化潜能。这种材料将在纤维环组织工程研究中具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种可注射性软骨脱细胞外基质混合脱钙骨基质水凝胶及其制备方法。本发明将同种或异种软骨经过脱细胞处理制备软骨细胞外基质，同时将同种或异种骨组织经过脱脂、脱钙、脱细胞处理制备脱钙骨基质，二者按照一定比例混合后再经过胃蛋白酶消化，在中性pH、37°C和适宜盐浓度条件下固化成可注射性水凝胶。使用本发明所述方法制备的软骨脱细胞外基质混合脱钙骨基质水凝胶具有良好的生物可降解性，最重要的是具有可注射性；同时，由于进行脱细胞处理，免疫原性大大降低，具有较好的生物相容性，生物排斥反应降低；本发明取材简单，操作方便，可用于各种软骨缺损填充及微创骨科软骨修复治疗，具有良好的临床应用前景。

摘要： 本发明描述了一种从罗非鱼(尼罗罗非鱼)的皮肤中获得细胞外基质的方法，该方法包括以下步骤：化学和酶促脱细胞、脱毒、化学消毒、交联、漂白、脱水和通过γ辐射灭菌，更具体地，每个所述程序包括的步骤以及所述细胞外基质在治疗组织破裂；皮炎；急性、慢性和创伤性损伤；战场伤口；坏死性伤口；撕裂伤；擦伤；挫伤；和其他病变和病状中的用途。本发明属于药学、医学和兽医学、牙医学、化学、组织工程学、分子生物学和生物技术领域。

摘要： 本发明涉及组织工程技术领域，尤其涉及一种脱细胞真皮基质的制备方法及制得的脱细胞真皮基质。本发明提供的脱细胞真皮基质的制备方法能够将细胞成分去除干净，抗原性低，保留了真皮胶原结构，异源DNA含量极低，且具有良好的力学性能。

摘要： 本发明公开了一种软骨细胞外基质的制备方法及其用到的脱细胞组合液和制得的软骨细胞外基质。该软骨细胞外基质的制备方法包括以下步骤：S1、对动物源关节软骨进行研磨得到骨粉；S2、用包含了蛋白酶抑制剂的缓冲液冲洗软骨粉末，并进行离心得到离心沉淀；S3、缓冲液清洗离心沉淀物，过滤并冷冻干燥得到软骨粉末；S4、采用脱细胞液A、脱细胞液B、脱细胞液C依次对软骨粉末进行去细胞处理，并用包含了蛋白酶抑制剂的缓冲液冲洗脱细胞处理的软骨组织并离心处理，得到去细胞的软骨组织；S5、对去细胞的软骨组织用核酸酶处理并离心，用缓冲液清洗离心沉淀物，冷冻干燥得到软骨细胞外基质。本发明制得的软骨细胞外基质品质高。

摘要： 本发明公开了一种可注射性软骨脱细胞外基质混合脱钙骨基质水凝胶及其制备方法。本发明将同种或异种软骨经过脱细胞处理制备软骨细胞外基质，同时将同种或异种骨组织经过脱脂、脱钙、脱细胞处理制备脱钙骨基质，二者按照一定比例混合后再经过胃蛋白酶消化，在中性pH、37°C和适宜盐浓度条件下固化成可注射性水凝胶。使用本发明所述方法制备的软骨脱细胞外基质混合脱钙骨基质水凝胶具有良好的生物可降解性，最重要的是具有可注射性；同时，由于进行脱细胞处理，免疫原性大大降低，具有较好的生物相容性，生物排斥反应降低；本发明取材简单，操作方便，可用于各种软骨缺损填充及微创骨科软骨修复治疗，具有良好的临床应用前景。

摘要： 本发明公开一种SDS脱细胞溶液及其在脱细胞处理或细胞外基质不可溶组分鉴定中的应用。首先公开了一种SDS脱细胞溶液，由溶剂PBS溶液和溶质0.5M NaCl、1.5％SDS、0.1％Triton X‑100、0.1％Tween 20和1mM蛋白酶抑制剂混合物组成。进一步公开了其在脱细胞处理或细胞外基质不可溶组分鉴定中的应用。本发明脱细胞方法在SDS法脱细胞前，增加了冷冻/解冻三次循环以及针尖扎眼等步骤，另外利用优化的SDS脱细胞溶液，适用于小鼠整体器官或组织或小块组织的脱细胞，操作简便，且经济成本较低，脱细胞效果显著，最大限度提高了ECM组分的纯度，以后续蛋白质谱鉴定ECM不可溶组分。

摘要： 本发明公开了一种利用脱细胞技术处理天然的组织或器官，经过后续打粉、酶消化处理得到脱细胞基质溶液，通过温和的条件即可将脱细胞基质溶液制备得到各种形状和性质的脱细胞基质凝胶，本发明制备方法制备得的脱细胞基质凝胶可用于可注射凝胶以及可加工成型凝胶两个方面，并且形成的凝胶具有微观的纳米纤维结构，该微观结构对于调节细胞的行为具有积极效应。

摘要： 本发明公开了一种脱细胞基质支架的制备方法及通过该方法获得的脱细胞基质支架，制备方法包括：交联步骤：将经脱细胞处理的天然软骨基质注入模具中冷冻干燥后进行紫外交联4‑8h，然后加入EDC和NHS的混合溶液再进行交联20‑24h，清洗并冷冻干燥、灭菌，得到脱细胞基质支架；脱细胞基质支架通过上述的制备方法得到；该方法以紫外交联结合EDC和NHS的混合溶液的双交联方式，配合冻干工艺，提高了支架表面孔隙的均匀和致密性，能提升细胞在材料表面的附着、生长情况。

摘要： 本发明公开了一种利用脱细胞技术处理天然的组织或器官，经过后续打粉、酶消化处理得到脱细胞基质溶液，通过温和的条件即可将脱细胞基质溶液制备得到各种形状和性质的脱细胞基质凝胶，本发明制备方法制备得的脱细胞基质凝胶可用于可注射凝胶以及可加工成型凝胶两个方面，并且形成的凝胶具有微观的纳米纤维结构，该微观结构对于调节细胞的行为具有积极效应。

摘要： 本发明属组织工程领域，具体涉及一种促进细胞快速增殖及促进其细胞外基质沉积的血管支架，包括添加了细胞因子、小分子药物或miRNA的管状聚合物纤维支架；所述活性因子包括TGF‑β、VEGF、PDGF生长因子中至少一种；所述小分子药物包括DMOG的至少一种；所述miRNA包括miRNA‑221、miRNA‑146a的至少一种；所述管状聚合物纤维支架采用可降解聚合物材料；所述培养条件调控手段包括低氧诱导培养。本发明的有益效果在于，能够快速制备脱细胞基质人工血管，并且制备的脱细胞基质人工血管再生性好，远期通畅率高。