应用GFP标记基因研究RNAi载体的抑制效果

摘要

目的 用绿色荧光蛋白(GFP)反映RNA干扰(RNAi)载体的转染率,以研究RNAi载体的抑制效果.方法 将GFP基因和RNAi片段(特异性针对Bcl-2基因)连接至pC1载体上,构建共表达载体GFP/RNAi及其对照载体,转染293细胞,用荧光显微镜、流式细胞仪检测细胞的GFP转染率,并用TR-PCR分析RNAi抑制Bcl-2 mRNA表达的效果.结果 在293细胞中,GFP的转染率可达85%以上,此时观察到RNAi有效的抑制了Bcl-2 mRNA的表达.结论 在RNAi实验时,可选用GFP等标记基因作为载体转染率的判断标准,以进一步判断RNAi的作用效果.构建的RNAi载体有效的抑制了Bcl-2的表达,为下一步抑制肿瘤细胞的生长提供科学资料.