猪源多杀性巴氏杆菌的分离及毒力基因检测

摘要

目的:从安徽凤阳猪场采集鼻拭子样品进行多杀性巴氏杆菌(P m)分离鉴定和毒力基因检测,为了解猪场Pm的存在情况及其致病性奠定基础.方法:无菌采集猪的鼻拭子样品30份,用血琼脂培养基进行分离培养及纯化;提取分离菌的核酸作为模板,进行16S rRNA的PCR扩增及测序分析;然后用PCR方法检测Pm菌株的23个毒力基因,最后进行小鼠致病性试验.结果:用血琼脂培养基分离及16S rRNA的PCR鉴定方法分离到1株Pm菌株有425 bp的目的条带,其测序结果与Pm菌株VP161的同源性为99.52％;毒力基因的PCR检测结果表明,除toxA、hgbB、nanB、hs f1、tbpA等5个基因未被检出外,其余18个毒力基因均被检测出目的条带,其测序结果与Pm相应毒力基因的同源性位于98.82％ ～100％ 之间;小鼠致病性试验表明,实验组小鼠在18 h内均发生死亡,其心脏、肝脏和肺脏均有出血,而对照组小鼠正常,从病死小鼠肝脏组织中分离出与原分离菌株一致的Pm菌株.结论:本研究从猪鼻拭子样品中分离鉴定出1株Pm菌株,并检测出18个毒力基因,小鼠致病性试验表明该分离株有一定的致病性.