转基因番茄植株Mi1.2表达水平的Real Time PCR检测体系的建立

摘要

[目的]为转基因番茄植株的高通量筛选奠定基础.[方法]利用CTAB法提取番茄叶片总RNA进行Real Time PCR扩增,分析转Mi1.2基因的番茄植株表达水平的检测体系.[结果]提取RNA的A 260/A 280为1.78～1.88,RNA无明显降解.在严谨扩增条件下,引物SYBR2的扩增效率高于SYBR1.Mg 2+的适宜浓度为2.0 mg/L.Real Time PCR扩增产物具有良好的特异性,熔解曲线特异峰出现在84.5 ℃附近,在熔解曲线略低于83 ℃附近有极微弱的非特异峰.因此在定量反应中信号检测步骤应放在84 ℃.以4种不同模板分子数条件下扩增曲线Ct值得到的回归方程为Y=-3.78×log(copynumber)+39.50,相关系数为0.998.[结论]该试验获得的Real Time PCR体系可用于转基因植株表达水平的检测.