黑曲霉中国株(3.758)葡萄糖氧化酶(GOD)基因的克隆与结构分析

摘要

[目的]为充分开发黑曲霉在轻工业中的用途.[方法]以黑曲霉中国株(3.758)基因组DNA为模板,用LA Taq DNA聚合酶对葡萄糖氧化酶(GOD)基因进行PCR扩增,扩增片段纯化后与pUCm-T载体连接后,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞,经琼脂糖凝胶电泳法、酶切和PCR鉴定获得阳性克隆.对获得含GOD基因的克隆进行测序,分析其蛋白质氨基酸序列及限制性内切酶的图谱.[结果]经PCR扩增获得约1.8 kb的片段.获得的GOD基因编码序列共1818 bp,与报道的黑曲霉(ATCC9029)GOD基因序列仅有3个碱基之差.该基因序列具有多个限制性内切酶位点.黑曲霉不同菌株与中国株(3.758)GOD基因的同源性比较表明,不同黑曲霉菌株中GOD基因不同,而菌株ATCC9029与菌株NRRL-3是同一菌株.[结论]该研究获得了GOD基因的全长序列,为GOD的生物工程生产和相关植物基因工程奠定了基础.