摘要：用淀粉-KI培养基研究了黑曲霉(A spergillus niger)3.758及3.324的葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,简称GOD)的活性,结果黑曲霉3.324有活性,而3.758无活性。SDS-PAGE结果表明,黑曲霉3.324能编码完整的有活性葡萄糖氧化酶,而黑曲霉3.758则不能编码具有活性完整的葡萄糖氧化酶。用LA TaqDNA聚合酶,以黑曲酶3.758基因组DNA为模板,PCR扩增,获得1.8kb片段。连接于pUCm-T载体上进行了克隆和序列分析。结果和国外常用于基因克隆的黑曲霉(ATCC9029)的GOD基因序列相比较,只有三个碱基不同。其中1245位的C变为T,1539位的T变成C,761位的G变成了A。前二者均在密码子的第三位突变,氨基酸未变,而761位突变,便使TGA→TAG,而此处发生了琥珀无义突变。现使其GOD基因编码终止在761位,因此该菌自己不能编码完整的GOD酶蛋白,因此不表现酶活性,而当用SDS-PAGE也不会出现GOD酶蛋白的特异带,这和上述结果是一致的。依同法,用pGEM-Teasy载体克隆了黑曲霉3.324的GOD基因,并进行序列分析。同时比较研究了3.758和3.324 GOD基因的同源性。发现有35个碱基不同,导致8个氨基酸发生了变化,同时大部分碱基的改变均发生于GOD基因的中间部分,其N端C端同源性较高。此外黑曲霉3.324GOD基因GC含量下降,为57.9﹪,同时在761位无琥珀无义突变产生。这使得黑曲霉3.324能编码出完整的酶蛋白且在淀粉-KI培养基并显示出酶活性,而在SDSPAGE可以看出其GOD酶蛋白的条带。GOD可以氧化葡萄糖产生H2O2,而H2O2可作为植物自然防御系统的传递信号,诱导细胞产生过敏性坏死反应,并可使植物产生获得系统性抗病性,同时激活植物抗毒素合成及致病相关蛋白的表达。
