高效液相色谱法(HPLC)测定饲料中麦角固醇

摘要

[目的]建立一种测定饲料中麦角固醇的高效液相色谱法.[方法]首先确定波长,流动相和流速等色谱条件,然后研究KOH浓度、乙醇与KOH溶液比例、皂化温度和时间对麦角固醇得率的影响,确定最佳皂化条件.[结果]高效液相色谱条件为色谱柱HC-C18(4.6 mm × 150.0 mm,5 μm),流动相为纯甲醇,流速1.5 ml/min,检测波长281 nm,柱温30 ℃,进样量10 μl;最佳皂化提取条件为KOH质量分数35%,乙醇与KOH溶液加入比例20∶10 (V∶V),皂化温度85 ℃,皂化时间2 h;优化后标准曲线方程为Y=12.541X-7.603,R2=0.999 69,线性范围为0.5～50.0 mg/ml;添加水平为2.0,4.8 和 7.5 mg/kg时,加标回收率为101%～105%,RSD为1.6%～3.8%(n=5),最低检测限为0.625 mg/kg.[结论]该检测方法快速、灵敏、准确、可靠,适合饲料中麦角固醇的测定.