麦角固醇

摘要： 本研究探讨了α-松油醇对指状青霉抑霉唑抗性菌株Pdw03的抑制作用及其抑菌机理。体外实验结果表明α-松油醇抑制Pdw03生长的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal fungicidal concentration,MFC)均为4.00μL/mL;体内实验研究发现MFC和5 MFCα-松油醇可明显降低接种Pdw03椪柑果实的绿霉病发病率和发病直径;碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色实验发现,经1/2 MICα-松油醇处理后,Pdw03的细胞膜完整性降低,麦角固醇含量显著降低(P<0.05),麦角固醇合成相关基因ERG9表达量显著下调(P<0.05)。综上,α-松油醇通过抑制ERG9基因的表达影响菌株Pdw03的生长,可作为采后柑橘病害防治的有效替代品。

摘要： 目的 研究酵母菌中麦角固醇的提取以及纯化方法,探索提取高纯度麦角固醇的工艺路线.方法 首先将1.00 g酵母粉浸入20～30 ml乙醇中进行超声破壁,再取沉淀进行皂化反应:醇碱体积比为1:2、物料皂化剂比(m:V)为1:10、30％NaOH、70％乙醇、2.5 h的皂化时间、85°C的皂化温度.待反应液冷却,加入乙酸乙酯进行萃取操作,取乙酸乙酯相并浓缩,经柱层析得粗品,最后经重结晶纯化得麦角固醇产品.结果 麦角固醇的提取率为1.63％且纯度>98％.结论 采用该法提取和纯化麦角固醇,条件温和,纯度和提取效率均提高,且易于工厂实现工艺放大,批量生产.

摘要： 为寻找巴斯德毕赤酵母(Komagataella phaffii)中甲醇代谢潜在调控因子,通过转录组数据分析,发现受甲醇显著诱导而被甘油所抑制的SUT2(Sterol up take 2,固醇摄取基因2).固醇是过氧化物酶体膜重要组成部分,过氧化物酶体是甲醇代谢重要场所.为探究SUT2参与甲醇代谢功能机制,通过敲除及过表达SUT2基因,检测K.phaffii在不同碳源、时间点、氧含量条件下胞内麦角固醇含量及AOX1(Alcohol oxidase 1)酶活性变化;发现在甲醇培养基中SUT2通过促进胞内麦角固醇合成及过氧化物酶体膜形成,参与甲醇代谢.与之相反,ATG26(Autophagy-related gene 26,自噬相关基因26)通过促进麦角固醇合成甾醇葡萄糖苷,减少过氧化物酶体膜形成.最后,建立K.phaffii中SUT2及ATG26调控过氧化物酶体膜麦角固醇含量,响应甲醇代谢初步模型.

摘要： 目的研究酵母菌中麦角固醇的提取以及纯化方法,探索提取高纯度麦角固醇的工艺路线。方法首先将1.00 g酵母粉浸入20~30 ml乙醇中进行超声破壁,再取沉淀进行皂化反应:醇碱体积比为1∶2、物料皂化剂比(m∶V)为1∶10、30%NaOH、70%乙醇、2.5 h的皂化时间、85°C的皂化温度。待反应液冷却,加入乙酸乙酯进行萃取操作,取乙酸乙酯相并浓缩,经柱层析得粗品,最后经重结晶纯化得麦角固醇产品。结果麦角固醇的提取率为1.63%且纯度>98%。结论采用该法提取和纯化麦角固醇,条件温和,纯度和提取效率均提高,且易于工厂实现工艺放大,批量生产。

摘要： 根据毕赤酵母Sut2基因表达在甲醇培养基中显著升高的特性,进一步探究该基因的功能及其与甲醇代谢的关系.在毕赤酵母基因组中,利用同源重组原理,分别通过双交换和单交换构建Sut2敲除菌株与Sut2过表达菌株.同时培养GS115-ΔSut2、GS115-Sut2和GS115野生型菌株,检测并比较Aox1基因的转录和翻译水平.以甲醇和甲醛分别作碳源培养菌株,检测Sut2的转录水平,从而鉴定该基因的诱导剂.用高效液相色谱法(HPLC)检测毕赤酵母菌株细胞内外麦角固醇含量.结果显示:Sut2主要由甲醇所诱导,对Aox1有一定程度的正调控作用,但两个基因可能参与复杂的调控网络和反馈回路,因而间接相互作用;HPLC结果表明,Sut2基因可能与麦角固醇合成有关.探究Sut2对甲醇代谢的调控机理,进一步丰富了巴斯德毕赤酵母甲醇代谢通路.

摘要： 目的:检测不同采摘时间的莞香灵芝中活性物质的变化.方法:对不同采摘时间的莞香灵芝测定粗多糖、总三萜、蛋白质、麦角固醇的含量进行测定并做对比.结果:不同采摘时间灵芝中的粗多糖、总三萜、蛋白质及麦角固醇的含量具有明显差异,其中粗多糖、总三萜、蛋白质及麦角固醇含量均最高的是T5灵芝.结论:不同采摘时间的灵芝子实体,由于采收的不同,其含的四种功效成分的含量前期处于平缓变化,然后急剧增加.

摘要： 目的:比较8个产地灵芝子实体中灵芝多糖、灵芝总三萜及麦角固醇的含量差异.方法:利用蒽酮-硫酸法测定灵芝多糖含量;香草醛-冰醋酸法测定灵芝三萜含量;高效液相色谱法对灵芝麦角固醇的含量进行测定.结果:不同产地灵芝中的灵芝多糖、灵芝总三萜及麦角固醇的含量具有明显差异,其中海南灵芝多糖含量最高,山东灵芝总三萜含量最高,山东灵芝麦角固醇含量最高.结论:不同产地的灵芝子实体,由于栽培条件、地理气候因素的不同,其含的三种有效成分含量之间存在明显不同.

摘要： 选择C-18H质子单峰作为麦角固醇的目标定量特征峰,氘代氯仿作为溶剂、吡嗪作为内标物,建立3种食用菌麦角固醇的定量检测方法.通过优化采样参数、采集时间、扫描次数和弛豫延迟时间核磁检测条件,确定δ 0.63处的质子单峰C-18H作为麦角固醇的目标定量特征峰;经方法学评价,在0.55～5.30 mg/mg范围内,回归方程线性关系良好,相关系数R2为0.999 7,检出限和定量限分别为0.001 8mg/mL与0.045 0mg/mL;平均加标回收率为103.491 9％,方法的精密度与稳定性相对标准偏差均小于2％,食用菌样品检测验证该方法专属性,表明建立的方法对3种食用菌中麦角固醇定量检测具有快速准确的优势.

摘要： 为阐明酿酒酵母固醇与耐盐特性的关系,构建麦角固醇合成关键基因ERG3敲除菌株Bs-1;平板验证发现,Bs-1在60 g/L NaC1-酵母浸出粉胨葡萄糖(yeast extract peptone dextrose,YPD)平板上菌落生长被抑制,在80 g/L NaC1-YPD平板上完全不能生长;运用气相色谱-质谱联用检测菌株中固醇的种类和含量,发现Bs-1不能合成麦角固醇,却合成了5,6-二氢麦角固醇.此外,分析Bs-1和野生菌株BY4741的代谢发现,在60 g/LNaCI-YPD中,Bs-1的最大OD600nm为5.56±0.30,比BY4741降低了45％;Bs-1的最高乙醇产量为(4.20±0.00) g/L,比BY4741降低了35％;在盐胁迫条件下,Bs-1与BY4741相比会产生大量胞外甘油,但细胞对甘油的保留能力却减弱.结果 表明酵母中固醇种类的变化影响了细胞代谢特性和细胞膜的流动性,造成细胞胞内甘油外排增加,导致细胞耐盐性降低.

摘要： 目的：观察苦参碱对合轴马拉色菌麦角固醇生物合成的影响,探讨苦参碱抑菌机理.方法：通过高效液相色谱法(HPLC)检测苦参碱、酮康唑两组药物作用后合轴马拉色菌麦角固醇含量.结果：苦参碱组与酮康唑组均有抑制麦角固醇合成的作用无统计学差异(P=0.65＞0.05),说明两组作用相当.两组药物对于合轴马拉色菌临床株和标准株的抑制强弱有明显差异(P=0.02＜0.05),两组药物均对于标准菌株抑菌效果明显强于临床菌株.结论：苦参碱可以抑制合轴马拉色菌麦角固醇合成,作用与酮康唑相当,考虑其抑菌机制可能与破坏麦角固醇合成有关.

摘要： 麦角固醇是真菌细胞膜中的重要组成成分，是维生素D2的合成前体，也是一种相当重要医药材料，是一种潜在的抗癌药物。近年来，为获得麦角固醇的高产菌株，科研人员对各种菌种进行了大量的菌株选育工作。随着麦角固醇的生物合成途径被弄清，基因工程成为了选育麦角固醇高产菌株的一种非常重要、新颖的手段，并取得了不错的成绩。本文对所采用的各种选育方法进行比较分析，并着重对基因工程方法进行了叙述。

摘要： 酵母是生物产品发酵的主要载体微生物之一,也是重组基因工程产品经常采用的宿主细胞.为提高生产过程的经济性和产品的市场竞争力,生物技术研究者不断创造更经济、更有效的方法,优化生产过程,实现高生产率.酵母细胞的高密度培养是提高酵母表达产品生产水平的重要手段.麦角固醇和谷胱甘肽均为重要的医用品和保健品,前者是合成维生素D2的前体,后者是生物体内重要的还原剂.目前国内外生产麦角固醇的方法有2种:一是采用酵母发酵法,即通过培养生产麦角固醇的酵母而得到;另一种是从青霉菌丝体中提取麦角固醇.我国在20世纪80年代末由中科院微生物所等单位开始研究发酵法生产麦角固醇.发酵法所用菌种主要为酵母菌.该方法生产的麦角固醇含量高.提取法所用的原料是青霉菌菌丝体,工艺简单,但提取含量不高.谷胱甘肽的生产方法主要有萃取法、化学合成法、发酵法、固定化细胞(或酶)法等.萃取法是生产谷胱甘肽的经典方法,也是发酵法生产流程中下游工程的基础.它主要是从高含量谷胱甘肽的动植物组织中提取谷胱甘肽所采用的一种方法,如从鼠血、鼠肝、鸡血、植物种子胚芽、酵母中提取谷胱甘肽.化学合成法生产谷胱甘肽始于二十世纪七十年代,其主要原料是谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸等,用氨基酸作原料合成谷胱甘肽,大体上是经过基团保护、缩合、脱保护三个阶段.目前谷胱甘肽的化学合成生产工艺已较成熟,但存在成本高、反应步骤多、反应时间长、操作复杂、需光学拆分和环境污染等问题.发酵法生产谷胱甘肽是最为普遍的方法,其工艺及方法不断改进,其中以诱变处理获得高谷胱甘肽含量的酵母变异菌株来生产谷胱甘肽最为常见.酵母诱变方法有药剂(如亚硝基胍等)处理法,X射线、紫外线、γ射线或Co照射等方法,其中药剂处理较容易掌握,投资也较小.可通过选育(或构建)谷胱甘肽合成能力强和胞内含量高的微生物,筛选和优化培养基配方,建立和优化发酵控制策略,改进和提高下游工程技术等,最终提高谷胱甘肽的产率和质量.利用生物体内的天然谷胱甘肽合成酶,以L-谷氨酸、L-半胱氨酸及甘氨酸为底物,并添加少量三磷酸腺苷可合成谷胱甘肽.酶合成反应需要ATP的参与,故这种方法成本较高,不易实现工业化.综上,由于麦角固醇合成与谷胱甘肽合成是酵母菌两个不同的代谢途径,故考虑利用联产的方法来节约两种产品的生产成本.

摘要： 实践分析了酵母生产麦角固醇的流加培养过程,PO、Mg和Fe对酵母菌细胞生长及麦角固醇合成的影响。提出了比生长速率为控制参数的流加方案,并以生物量、麦角固醇含量等因素为依据确定了该发酵体系的最优化培养参数。结果表明:3种无机盐在所测试的浓度范围内均能促进酵母菌细胞生产,提高生物量,对麦角固醇的合成也有显著的促进作用。当培养基中分别加入0.2g/100ml的KHPO、0.15g/100ml的MgSO、0.005g/1100ml的FeSO时,刺激麦固醇合成作用最强,麦角固醇含量分别增加了39.7％、95.5％和35.2％,确定了该发酵体系的最优化培养参数。在最优化方案下,生物量可达4.2g/100ml,麦角固醇含量达3.26g(每100g干菌体中)。rn 勐永药业公司主要生产药用酵母、麦角固醇酵母、麦角固醇、药用辅料蔗糖、药用辅料乙醇的产家。勐永药业公司始建于是1996年,04年通过GMP认证,于2006年完善规范生物实验室,利用10年的生产实践验,接合一些新的科研成果,通过生产实践和实验总结,取得了酵母发酵生产麦角固醇培养过程高生物量和高含量的统一的一些经验。rn 麦角固醇是甾族化合物中的一种甾醇,麦角固醇是一种重要的医药化工原料,用于"可的松"、"激素黄体酮"的生产。麦角固醇还是合成维生素D的前体,经紫外线照射后可得到维生素D,维生素D在调节生命代谢功能上有重要作用。rn 目前麦角固醇的生产主要采用微生物发酵法,所用菌种大多为酵母菌。国外对麦角固醇产的菌株选育、合成代谢途径及其发酵条件等均有较为深入的研究。实际上,由于麦角固醇为胞内产物,其含量随菌种和培养条件的不同而不同,因而生产过程控制应当以高生物量和高含量相统一为目标。国内从20世纪50年代开始研究从酵母菌中提出麦角固醇,但普遍存在的问题是菌种麦角含量较低。近年来勐永药业公司对麦角固醇菌株选育及其发酵条件进行了跟踪。酵母菌麦角固醇含量主要取决于菌株的遗传特性和培养条件。结合跟踪情况和一些报道,现已证明,碳源、氮源、初始PH值、培养时间、通气量、等因素对细胞麦角固醇含量均有影响作用,而无机盐对酵母菌产麦角固醇的影响国内报道也不详细。本文在原有工作基础上,通过10年的生产实践探讨了3种无机盐和确定了以比生长速率为控制参数的流加培养方案对酵母菌产麦角固醇的影响。

摘要： 用一种在线监控乙醇浓度反馈脉冲式流加的方法高密度发酵生产麦角固醇,并对发酵过程各种参数(pH,溶氧,乙醇浓度,摄氧率,二氧化碳释放速率,呼吸熵)进行分析.结果发现根据发酵过程中乙醇体积浓度变化来调节流加糖的速率,并以氨水调节发酵过程pH是一种有效的流加方案.各种过程参数之间的关系很好地反映了整个发酵过程的变化规律.在5L发酵罐中,培养温度30°C,pH5.5,转速600rpm,发酵时间60h,控制乙醇体积浓度1.0％以下,酵母生物量为120g/L,麦角固醇产量达到1500mg/L。

摘要： 本文用一种在线监控乙醇浓度反馈脉冲式流加的方法发酵生产麦角固醇,并对发酵过程中的各种参数进行分析.结果发现根据发酵过程中乙醇体积浓度变化来调节流加糖的速率,并以氨水调节发酵过程pH是一种有效的流加方案.麦角固醇产量达到1.5g/L,酵母生物量为120g/L.

摘要： 研究了麦角固醇发酵过程中溶氧和其它参数如OUR、pH和残糖浓度等的关系,及其对酿酒酵母的生物量和麦角固醇含量的影响.研究表明,溶氧能比较准确的反映酵母的生长善,是发酵过程中的一个较好的控制参数.将溶氧控制在12﹪左右能有效的提高单位体积发酵液中的麦角固醇的产量.

摘要： 本文用KOH与无水乙醇二步浸泡法提取藤仓赤毒菌(Gibberella fujikuroi)干菌体中的麦角固醇,建立了麦角固醇含量的硫磷铁比色测定法.结果表明,标准曲线在浓度为0.05mg/ml-0.30mg/ml范围内线性良好,所得的实验结果与高效液相色谱测得的结果十分相近.该方法的回收率在95.0﹪-98.5之间.

摘要： 麦角固醇以一种重要的医药化工原料，可用于“考的松”和“激素黄体酮”等药物和农药的生产，同时麦角固醇又是维生素D2生产的主要原料。维生素D2可提高人体和动物的钙磷吸收,促进骨骼的形成.若摄入量不足,会引起严重的缺乏病,如儿童的佝偻病,老年人的骨质疏松病等。本文介绍了麦角固醇和维生素D2的工艺流程，分析了两者的经济可行性，并对麦角固醇和维生素D2的环保问题进行论述。

摘要： 本发明公开了一株高产麦角固醇的酵母菌JHpharm5‑1,其名称为酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae，保藏号为CGMCC No.20137，已于2020年06月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。该高产麦角固醇的酵母菌JHpharm5‑1可在麦角固醇生产中应用，其产量高到7.2g/100g干菌体，比现有菌种的最高产量提高了53％，提高了产量的同时可降低生产成本。

摘要： 本发明提供了一种麦角固醇的制备方法，先将菌种超声处理，皂化，柱层析纯化，再经过两次重结晶得到麦角固醇产品。麦角固醇的提取率可达1.63%，纯度高于99%，含量高于95%。本发明结合了超声破壁和皂化提取的优势，并创新得将两个操作分步进行，大大提高提取率。除此之外，经试验发现纯化过程中，柱层析结束后进行两次重结晶，产品纯度最高，显著优于一次或三次重结晶。整个麦角固醇的制备方法，所使用的溶剂大都能够循环套用，生产条件温和，工厂易实现批量化生产，成本低，效率高，产品优质。

摘要： 本发明公开了一种同步检测食用菌中麦角固醇与维生素D2的方法与应用。该方法包括如下步骤：(1)超声皂化法提取：利用超声皂化法从食用菌样品提取麦角固醇和维生素D2，得到提取液样品；(2)标准液的配制：配制至少三个浓度的麦角固醇和维生素D2混合液作为标准液；(3)测定：将各浓度梯度的标准液通过液相色谱‑串联质谱法测定，以标准液的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准工作曲线；然后在相同条件下将提取液样品通过液相色谱‑串联质谱法测定，并将检测结果与标准工作曲线对照，计算出样品中麦角固醇和维生素D2的含量。本发明的方法具有耗时短，检测限低、适用范围广以及准确的特点，适用于大批量食用菌样品检测。

摘要： 本发明公开的一种电场‑半仿生技术制备绣球菌麦角固醇的方法，包括以下步骤：（1）取绣球菌子实体，研磨过筛，得绣球菌粉末；（2）外电场条件下，以pH为9‑10的强碱溶液为原料，90°C下皂化反应，得到麦角固醇；（3）电解还原所述步骤（2）中由变性蛋白解吸的重金属离子；（4）取所述步骤（3）中所得混合液，离心分离，得到底层沉积物、中层絮凝物及上清；（5）取所述中层絮凝物，以乙醇的水溶液为提取液，弱酸调节pH至3‑4，水浴提取，过滤，得滤液；（6）合并上清及滤液，调节pH至中性，旋转蒸发得浓缩液，真空冷冻干燥所述浓缩液，所得粉末即抗氧化绣球菌麦角固醇，麦角固醇提取率高，去除重金属及绣球菌蛋白，性质稳定，经胃肠道吸收好。

摘要： 本发明公开了一种如式I所示的5,8‑(14),22‑三烯‑7‑酮,3‑羟基,(3β,22E)麦角固醇的制备方法，其包括下列步骤：将镰刀菌(Fusarium)的种子液接种进行发酵培养，得发酵液；其中，发酵培养的时间为144～240h；发酵培养基包括20～40g/L葡萄糖、10～30g/L(NH4)SO4、5～15g/L酵母提取物、0.5～2g/LMgSO4·7H2O和0～1g/LFeSO4·7H2O。本发明的制备方法和纯化方法均工艺简单、条件温和环境友好、成本低、生产周期短、可在人工控制的条件下实现大规模生产、利于工业化。本发明的纯化方法能够获得HPLC纯度在90％以上的目标化合物，纯度高。

摘要： 本发明公开了光氧化合成7‑去氢胆固醇/麦角固醇内过氧化物及其衍生物的方法及相应化合物的用途。本发明利用一种内浸式光反应器进行光化学反应合成7‑去氢胆固醇内过氧化物及其衍生物，并对7‑去氢胆固醇内过氧化物抗癌活性进行了探究。本发明中所使用的光敏氧化方法不涉及剧毒性溶剂，对环境友好、安全系数高，反应时间短，产物易于分离纯化，是一种理想的工业生产工艺。

摘要： 本发明属于涉及一种从废弃酵母菌种中提取葡聚糖、麦角固醇和壳聚糖的方法。本发明所提供的废弃酵母菌其采用粉碎过筛对废弃酵母菌种进行预处理，使用硝酸破壁，经碱处理、醇沉、浸提脱乙酰、酸溶和碱沉干燥后得到壳聚糖及中间产物葡聚糖和麦角固醇。本发明实现了废弃酵母菌种的综合再利用，解决了工业废物的治理问题，可操作性强，与传统提取法相比，高效、节能、省时、操作简单可实现高附加值的生产。

摘要： 本发明提供了一种麦角固醇的制备方法，先将菌种超声处理，皂化，柱层析纯化，再经过两次重结晶得到麦角固醇产品。麦角固醇的提取率可达1.63%，纯度高于99%，含量高于95%。本发明结合了超声破壁和皂化提取的优势，并创新得将两个操作分步进行，大大提高提取率。除此之外，经试验发现纯化过程中，柱层析结束后进行两次重结晶，产品纯度最高，显著优于一次或三次重结晶。整个麦角固醇的制备方法，所使用的溶剂大都能够循环套用，生产条件温和，工厂易实现批量化生产，成本低，效率高，产品优质。

摘要： 本发明属于甾体类药物中间体的生产方法，具体涉及一种采用生长细胞生物发酵麦角固醇制备中间体的方法。本发明包括以下步骤：(1)3位保护；(2)生长细胞转化；(3)提取；(4)水解；(5)精制。本发明的制备方法成本较低，路线更短，省掉了许多反应步骤和后处理步骤，反应路线的缩短也有利于反应收率的提高，减少中间损耗。本发明采取3位羟基保护的步骤在前，生长细胞生物发酵反应在后，直接加大了发酵底物在发酵液中的溶解度，有利于发酵的进行，可提高产物的收率，减少杂质的产生。本发明的制备方法还能减少化学试剂的使用，有利于环境保护。

摘要： 本发明属于甾体类药物中间体的生产方法，具体涉及一种采用静息细胞生物发酵麦角固醇醚化物制备中间体的方法。本发明包括以下步骤：(1)3位保护；(2)静息细胞转化；(3)提取；(4)水解；(5)精制。本发明的制备方法成本较低，路线更短，省掉了许多反应步骤和后处理步骤，反应路线的缩短也有利于反应收率的提高，减少中间损耗。本发明采取3位羟基保护的步骤在前，生长细胞生物发酵反应在后，直接加大了发酵底物在发酵液中的溶解度，有利于发酵的进行，可提高产物的收率，减少杂质的产生。本发明的制备方法还能减少化学试剂的使用，有利于环境保护。