抗苯巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及ciELISA试剂盒的研制

摘要

用BSA-pAPB免疫Balb/c小鼠,用细胞融合技术制备并用间接ELISA和阻断ELISA筛选抗苯巴比妥单克隆抗体(PB mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法生产PB mAb,应用PB mAb研制PB残留竞争ELISA(ciELISA)快速检测试剂盒(PB-Kit),并测定其性能.结果表明,筛选出3株杂交瘤细胞,最好的3F6-C4株的PB mAb间接ELISA效价为1∶6.4×105,亲和常数(Ka)为1.96×1010 L/moL,半数抑制浓度(IC50)为5.7μg/L,与巴比妥的交叉反应率(CR%)12.4%,与其它化合物无CR;PB-Kit的线性检测范围1.0～81μg/L,灵敏度0.75μg/L,检测限1μg/L;饲料样和猪尿样的平均添加回收率85.8%和91.3%,平均批内和批间变异系数均＜15%.PB-Kit具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合PB残留快速检测的推广应用.