犬细小病毒核酸疫苗的构建及其免疫小鼠检测

摘要

用PCR方法扩增犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)貉分离株(PV/貉/CC/1/86)的VP2蛋白基因,并将其克隆入pMD18-T,命名为pTCPV,进行测序分析.结果除发现300G→S突变外,还发现32G→D突变.然后将PV/貉/CC/1/86VP2蛋白基因克隆入真核表达载体pVAX1的CMV启动子的下游,构建了CPV核酸疫苗的真核表达质粒pVCPV. pVCPV转染BHK-21细胞能够表达CPV VP2蛋白,所表达的CPV VP2蛋白能够与抗CPV的阳性抗体发生特异性的抗原-抗体反应.用pVCPV免疫接种小鼠,用ELISA和微量中和试验检测免疫小鼠抗CPV抗体阳性,但是没有检测到抗CPV HI抗体;pVCPV免疫小鼠的脾淋巴细胞对特异性和非特异性抗原刺激均有明显的增殖.结果表明,pVCPV免疫接种小鼠能够诱导机体产生抗CPV的特异性体液免疫和细胞免疫.