番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达

摘要

参考已发表的番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,mDRV)的S4序列,自行设计1对扩增σC基因的引物,对mDRV ZJ99株的RNA抽提物进行RT-PCR扩增,成功地获得了843 bp特异性的扩增片段(GenBank:AY619690).将PCR产物克隆测序,BLASTn比较结果显示,mDRVZJ99株σC基因与福建MW9710株对应基因的同源性为98%,与法国89026和89330株对应基因的同源性分别为92%和93%;BLASTp比较结果显示,ZJ99株编码的σC蛋白与MW9710、89026和89330株相应蛋白分别具有94%、89%、89%同一性(identity)和95%、92%、93%相似性(similarity).进一步将σC基因亚克隆至原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),IPTG诱导阳性重组子,SDS-PAGE电泳检测发现,σC蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式高效表达,目的蛋白的表达量可达到细菌总蛋白的22.9%.