番鸭呼肠孤病毒S组基因序列分析及衣壳蛋白克隆表达

摘要

禽(番鸭)呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus，DRV)是新近发现的番鸭“肝白点病或花肝病”的病原。该病的主要临床特征是精神萎顿、软脚、排绿色带有粘液稀粪、部分病鸭趾关节或跗关节有不同程度的肿胀及耐过鸭生长发育受阻；主要病理变化为肝、脾表面有多量小白点、肾脏肿大、出血、表面有黄色条斑。在患病番鸭中，雏番鸭最为易感，死亡率很高。禽源呼肠孤病毒(Avian reovirus，ARV)经常以抗原亚型存在，不易确定独立的血清型。病毒基因组中的4个小基因节段(S1、S2、S3和S4)是研究ARV遗传演化的关键，已发现ARV分离株S组基因具有两种基因型：一种基因型的代表株为DRV-89026和DRV-89330，另一种基因型的代表株为ARV-S1133。本实验室从番鸭“肝白点病”患鸭的肝脾匀浆中分离到7个病毒分离株，通过病毒病的常规实验诊断证实均为DRV。为了进一步了解DRV福建分离株的遗传演化关系，本研究选取番鸭源原代株YB和克隆株YJL、传代株YH进行病毒4个小基因节段(S组)基因节段序列测定与分析。

目录

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第一部分引言

第二部分禽(番鸭)呼肠孤病毒株S组基因序列分析

材料与方法

1 材料

2方法

结果与分析

1 RT-PCR扩增结果

2 YH、YJL和YB的S组基因的阳性质粒PCR鉴定

3 cDNA的序列测定

4测序结果的联机检索

5 DRV核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析

6 D R V-S组基因系统发生树的建立

讨论

1 YJL、YH-S1和YB-S4基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较

2 YJL-S4和YB-S2基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较

3 YJL-S2和YB-S1基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较

4 YH，YJL和YB-S3基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较

第三部分DRV-YB株的S3与S4ORF2基因的原核表达

材料与方法

1 材料

2方法

结果与分析

1对YB的S3和S4ORF2基因RT-PCR扩增结果

2 YB的S3和S4ORF2基因阳性质粒PCR鉴定

2.1 YB-S4ORF2基因的阳性质粒PCR鉴定

2.2 YB-S3基因的阳性质粒PCR鉴定

3表达产物SDS-PAGE分析和Western-blotting分析

3.1诱导表达蛋白的分析

3.2表达产物的Western-blotting检测

4蛋白胶薄层扫描分析重组表达蛋白

讨论

结论

参考文献

附录：禽流呼肠孤病毒S组基因序列

致谢

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