应用酵母双杂交系统筛选与CASTOR相互作用的蛋白

摘要

castor编码百脉根(Lotus japonicus)中的离子通道蛋白,它是共生途径上的功能基因,作用于结瘤因子诱导产生的钙离子激增(calcium spiking)信号转导途径的上游,突变后不能形成根瘤.为了进一步揭示castor调控共生信号途径的分子机制,通过酵母双杂交系统在百脉根的cDNA文库中筛选可能与CASTOR相互作用的蛋白,以酵母(Saccharomyces cerevisiae)配合的方法初筛获得111个阳性克隆,经X-Gal检测进一步确认有99个蓝色克隆子,测序以及NCBI blast比对分析鉴定出 JAB1、CLPA、钙调素结合的翻译延伸因子等7种可能与CASTOR相互作用的蛋白,利用RT-PCR方法检测了这些基因在接种以及不接种根瘤菌(Mesorhizobiumloti)的百脉根中的表达水平,分析推测CASTOR可能与上述蛋白形成复合物参与共生信号的转导.