应用酵母双杂交系统筛选中国文昌鱼神经胚中与BMP相互作用的蛋白及BMP与DDAH相互作用的研究

摘要

本文应用酵母双杂交技术，构建了文昌鱼BMP成熟蛋白的酵母融合表达载体pGBKT7-Bmp，通过Western-blot和酵母转化筛选，确证了pGBKT7-Bmp在酵母细胞中正确表达且不具有自主激活报告基因的活性，可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”。为研究BMP信号途径的组成、功能和机理奠定了基础。　　本文通过分析文昌鱼DDAH重组蛋白水解ADMA的活性，发现文昌鱼DDAH具有高等动物中dimethylargininedimethylaminohydrolase(DDAH)的催化活性，为DDAH的同源物。RT-PCR结果显示文昌鱼DDAH只在原肠胚、神经胚表达，而在成鱼中不表达，这与高等脊椎动物广泛的表达模式明显的不同，这可能与文昌鱼这种特殊的进化地位有关，同时也说明文昌鱼的DDAH与胚胎的早期发育有关。　　本文通过酵母双杂交系统筛选出与文昌鱼BMP相互作用的蛋白，对于认识文昌鱼BMP信号调节的机制和胚胎发育的分子机理具有重要的意义。

目录

论文说明：缩略语

摘要

第一章绪论

1.1序言

1.2 BMP(Brone morphogenetic protein)的研究进展

1.3酵母双杂交系统的应用研究进展

1.4本论文研究的目的和意义

1.5本论文的创新点

1.6研究的技术路线

第二章BMP成熟肽诱饵蛋白载体的构建、表达及其酵母双杂交系统中自激活作用的检测

2.1材料与方法

2.2结果与分析

2.3讨论

2.4小结

第三章应用酵母双杂交系统筛选与BMP相互作用的蛋白质

3.1材料与方法

3.2结果与分析

3.3讨论

3.4小结

第四章DDAH与BMP在酵母双杂交系统中相互作用的研究

4.1材料与方法

4.2结果与分析

4.3讨论

4.4小结

第五章CO-IP确证BMP与DDAH的相互作用

5.1材料与方法(参考Lab Manual of Dr.C.LIANG)

5.2结果与分析

5.3讨论

第六章GST Co-pull Down确证DDAH与BMP的相互作用

6.1材料与方法

6.2结果与分析

6.3讨论

6.4小结

第七章文昌鱼DDAH基因的克隆、序列分析、表达模式的研究

7.1材料与方法

7.2结果与分析

7.3 讨论

7.4小结

附图

第八章DDAH和BMP多克隆抗体的制备

8.1材料与方法

8.2结果与分析

8.3 讨论

8.4小结

总结与展望

参考文献

附录

攻读博士学位期间参与的课题研究和成果

致谢

本人郑重声明