加强Psy基因表达和通过RNAi抑制Lcy基因表达的载体构建

摘要

根据GenBank中拟南芥的八氢番茄红素(Psy)基因序列从拟南芥(Arabidopsis thaliana)的cDNA中分离了一段长1 296 bp的Psy基因;根据GenBank中番茄的番茄红素β-环化酶(Lcy)序列和八氢番茄红素去饱和酶基因(Pds)启动子序列分别从番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)DNA中扩增出了Lcy基因的高度保守的含302bp的DNA片段和含1790 bp的Pds启动子片段.根据RNAi的原理,将Lcy基因的DNA片段以正反两个方向通过一段内含子序列连接在一起形成RNAi片段,将该片段与Psy基因一起插入到抗Kan的pVCT2020的表达载体中,并通过具有果实特异性特点的启动子Pds启动子调控这两个片段的表达,从而构建成了能同时加强Psy基因的表达和抑制Lcy基因表达的果实特异性植物表达载体,通过酶切鉴定证明所构建的载体正确.