放射性电泳迁移率改变分析法实验体系的优化

摘要

电泳迁移率改变分析法(EMSA)是研究核转录因子体外结合特性最常用的方法.为了提高EMSA实验的稳定性和成功率,降低实验人员接触同位素的频率,对放射性EMSA实验体系进行了优化.结果表明,探针的纯化有效地降低了自显影的背景;用水溶解蛋白并离心后取上清用于结合反应有利于获得整齐清晰的条带;采用350 V ,4℃进行电泳,保证了电泳过程中DNA-蛋白复合物的稳定结合;拭去凝胶表面带有放射性的液体,并附着于有一定硬度的纸片,有利于得到清晰的显影图片.优化后的体系有效地提高了EMSA实验的稳定性和成功率.