栎属植物流式细胞术实验体系的建立与优化

摘要

为建立适于栎属植物的流式细胞核实验体系,分别利用Tris-MgCl2、Galbraith＇s、Marie＇s和Otto＇s细胞核分离缓冲液对麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎制备细胞核悬浮液。检验发现：Tris-MgCl2、Galbraith＇s缓冲液所制备样品未能检测出DNA峰,Otto＇s缓冲液制备的样品中,除白栎外其他3个样品的测试结果均较差,Marie＇s缓冲液所制备的4个样品测试DNA峰的变异系数（CV）均大于10%。采用正交设计方法对经典Marie＇s缓冲液中的β-巯基乙醇和Tween 20组分进行了优化,发现麻栎、栓皮栎、白栎和短柄枹栎的最适β-巯基乙醇浓度和Tween 20体积比分别为45 mmol/L和2.5%、15 mmol/L和2.0%、60 mmol/L和1.0%及30 mmol/L和1.0%。运用改进后的最适Marie＇s缓冲液进行流式细胞核测定,4种样品的变异系数均显著下降（在3.52%-4.81%之间）,表明改进后的Marie＇s缓冲液对4种栎属植物的测试结果准确可信。