马γ-干扰素单克隆抗体的制备及其特性分析

摘要

将原核表达的重组马γ-干扰素成熟蛋白(mEIFN-γ)免疫BALB/c小鼠(Mus musculus),经4次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,以昆虫杆状病毒表达系统获得的重组马γ-干扰素作为检测抗原进行间接ELISA检测,共筛选并最终得到了12株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株.利用间接免疫荧光(IFA)试验对12株单克隆抗体进行鉴定,结果证实所获得的12株细胞分泌的抗体均为针对马γ-干扰素的特异性抗体.单克隆抗体亚型鉴定结果显示,4株为IgG1、2株为IgG2a、3株为IgG2b和3株为IgM,而且所有单克隆抗体的轻链均为κ链.将此12株单克隆抗体分别与用原核系统分节段表达的重组马γ-干扰素GST-mEIFN-γ(1-84)>和GST-mEIFN-γ(80-146)>蛋白进行特异性ELISA检测,结果表明有7株单克隆抗体识别GST-mEIFN-γ(1-84)>,而另5株单克隆抗体与GST-mEIFN-γ(80-146)>发生反应,说明所获得的12株单克隆抗体至少针对2个或2个以上不同的抗原表位.