拟南芥柯浩体蛋白(Atcoilin)的功能预测及亚细胞定位

摘要

柯浩体(cajal body,CB)是细胞核重要组分,在动植物生长发育以及病毒侵染过程中发挥着重要作用,coilin是CB指示蛋白.为揭示拟南芥(Arabidopsis thaliana)柯浩体蛋白(Atcoilin)的功能和亚细胞定位,本研究采用RT-PCR方法从拟南芥中扩增获得Atcoilin的cDNA,经克隆测序列后,利用生物信息学软件分析预测Atcoilin的亚细胞定位和功能域;将柯浩体蛋白与表达载体pEarley 101(带黄色荧光蛋白)重组,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)接种法将重组蛋白Atcoilin-YFP在本氏烟(Nicotianabenthamiana)叶片表皮细胞中进行瞬时表达,DAPI染色后在激光共聚焦显微镜下观察蛋白的亚细胞定位.生物信息学分析表明,Atcoilin亚细胞定位在细胞核上,该蛋白编码608个氨基酸,可分为3个功能域(N端有序折叠区,中间无序折叠区及C端区),与人类柯浩体蛋白高度同源,两者氨基酸序列总体一致性为50％; Western blot证实,重组表达载体在本氏烟中得到了正确的表达,并在激光共聚焦显微镜下观察,显示该蛋白定位在细胞核内.功能预测及细胞定位结果为该蛋白功能的深入研究提供基础资料.