单增李斯特氏菌Lm319主要毒力基因的时序性表达研究

摘要

单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria moncytogenes)是一种重要的食源性病原菌,由于其具有分布广、耐受力强、高致病力等特点而备受食品安全领域所关注.本研究通过摇瓶培养和检测菌液OD600值制作了该病原菌的生长曲线;采用特异引物对单增李斯特菌Lm319中27个毒力基因进行了PCR检测;采用实时荧光定量PCR技术(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)对其中的10个毒力基因的表达量进行了12个批次的定量检测.结果表明,Lm319在培养2h内处于生长延滞期,培养2～8 h为菌体的指数生长期,培养8h菌体增长量达到最高峰,8～18h为菌体生长稳定期,18h后进入衰亡期;对27个毒力基因的PCR检测结果显示,Lm319中明确含有23个毒力基因;qRT-PCR定量检测结果显示,其中10个毒力基因在24 h内的表达规律相似,毒力基因的表达量在菌体生长的稳定期后期(16～18 h)达到高峰,此后表达量逐渐降低,但到衰亡期毒力基因的表达又呈上升趋势.同时发现,10个毒力基因的表达量差距明显且各不相同,其中细胞壁水解酶基因(invasion associated protein,iap)、纤连蛋白结合蛋白基因(fibronectin-binding protein,fbp)、己糖磷酸盐转运蛋白基因(hexose phosphate transporter,hpt)和sRNA伴侣蛋白基因(host factor for RNA phage Qβ replicase,hfq)4个基因表达量较高,而肌动蛋白聚集蛋白基因(actin polymerizing protein,actA)和溶血素基因(hemolysin,hlyA)两个毒力基因的表达量较低.研究表明,单增李斯特菌Lm319中主要毒力基因表达量在菌体生长的稳定期后期达到高峰,到衰亡期毒力基因的表达仍然处于相对较高水平.本研究为单增李斯特菌的检测、预防提供了理论依据.