鸭骨骼肌TNNI1基因CpG岛区甲基化与mRNA差异表达

摘要

本研究旨在通过克隆鸭慢速骨骼肌型肌钙蛋白I 1(Slow skeletal muscle troponin I 1,TNNI1)基因5′侧翼区序列,检测鸭骨骼肌组织TNNI1基因的mRNA表达水平和启动子CpG岛区甲基化状态,初步探索TNNI1基因转录调控机制.采用染色体步移方法克隆测序获得鸭TNNI1基因5′侧翼区序列,进行生物信息学分析,采用荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-PCR)检测鸭胸肌和腿肌TNNI1基因mRNA表达水平,采用亚硫酸氢盐测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP)检测核心启动子区CpG岛在鸭肌肉组织中的甲基化水平.结果表明,克隆获得鸭TNNI1基因5′侧翼区序列2078 bp,预测存在2个CpG岛,其中CpG岛(-2032～-1833 bp)位于预测的核心启动子区内,并存在多个真核生物结构元件和转录因子结合位点;甲基化检测发现,其总体甲基化水平在胸肌和腿肌组织中分别为52.66％、57.04％,差异不显著(P>0.05);荧光定量检测结果表明,鸭胸肌和腿肌TNNI1基因表达量差异显著(P<0.05);相关性分析结果表明,CpG4位点甲基化程度与胸肌TNNI1基因表达量呈极显著负相关(P<0.01).鸭胸肌和腿肌TNNI1基因的mRNA表达量存在显著差异,其总体甲基化水平无显著差异.在胸肌中,启动子区CpG4位点可能通过甲基化修饰影响TNNI1基因的转录调控.