传染性法氏囊病病毒VP2基因在多杀性巴氏杆菌弱毒株中的表达及免疫原性研究

摘要

将重组质粒pET28a-VP2转化禽多杀性巴氏杆菌弱毒株G190E40,探讨该转化菌表达的VP2是否具有免疫原性,以及重组表达质粒在转化菌内的稳定性.该转化菌在体外经IPTG或乳糖诱导,表达产物经AGP检测,VP2滴度可达1/4;经间接ELISA检测,VP2滴度可达1/512;经SDS-PAGE分析,出现VP2蛋白条带.结果表明,诱导表达的提取液中有一定量可溶性VP2.将pET28a-VP2转化的禽多杀性巴氏杆菌弱毒株G190E40经诱导后,接种爱维菌肉仔鸡,21日龄及35日龄时,分别肌肉注射菌液0.1、0.2 ml/只(3×108个/ml活菌).49日龄时,感染IBDV标准强毒株BC6/85.IBDVVP2血清抗体检测结果,不接种组(B)、0.1 ml接种组(C)、0.2 ml接种组(D)及空质粒转化菌接种组(E)的AGP抗体检测阳性率分别为0、65%、70%、0;间接ELISA抗体检测阳性率分别为0、80%、85%、0;IBDV强毒感染的免疫保护率分别为5%、75%、75%、5%.经t检验.B组与C组、B组与D组、E组与C组、E组与D组,P＜0.05,差异均显著,但B组与E组、C组与D组,P＞0.05,差异均不显著.免疫试验结果表明,诱导表达产物VP2可有效地刺激鸡体产生体液免疫应答,刺激鸡体建立的免疫力可以抵抗一定剂量强毒的攻击.在质粒稳定性测定中,第9代次及以后的3个代次,20个菌落的VP2目的基因PCR检测结果均为阴性,表明该质粒在禽多杀性巴氏杆菌弱毒株C190E40内是不稳定的.