沙地云杉 ISSR -PCR 反应体系的初步优化

摘要

以沙地云杉叶基因组DNA为材料，采用单因素试验方法对ISSR-PCR体系中的主要成分Mg2＋、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物浓度、退火温度进行筛选，建立并优化沙地ISSR-PCR反应体系。结果表明，UBC835是最适引物，适宜退火温度为50℃。沙地云杉ISSR-PCR分析的最适反应体系（20μL PCR反应体系）为：2．0 mmol/L Mg2＋、1．0 U/μL Taq DNA聚合酶、0．25 mmol/L dNTPs、0．25μmol/L引物、50 ng/μL模板DNA。 PCR扩增程序：94℃预变性4 min；94℃变性45 s，50℃退火45 s，72℃延伸2 min，40个循环；72℃延伸7 min，4℃保存。