紫杉醇关键酶基因TwDBAT在平菇中的遗传转化及表达

摘要

通过构建含平菇内源gpd启动子、红豆杉中TwDBAT基因的真核表达载体pgFvs－TwDBAT，建立高效的平菇原生质体制备与再生体系；采用PEG介导法，将真核表达载体pgFvs－TwDBAT、pgFvs－hph共转化高温型平菇菌株F7E原生质体，获得可以异源表达TwDBAT基因的平菇菌株。PCR和Southern杂交鉴定结果表明，TwDBAT基因整合进平菇基因组中；经继代培养，TwDBAT基因在转化子中可稳定遗传。RT－PCR结果表明，转化子在mRNA水平上转录了TwDBAT基因。HPLC结果显示，TwDBAT酶可以催化底物10－去乙酰巴卡亭Ⅲ（10－DAB）。