沙漠小球藻转植物表达载体的表达预测

摘要

以建立小球藻（沙漠小球藻）表达系统为目的，为利用小球藻重组表达外源蛋白，以及GFP荧光特性研究沙漠中的小球藻生理及理化性质提供基础方法；同时也探索植物表达载体pCAMBIA2300－35 S－OCS能否在沙漠小球藻中表达。通过菌落PCR验证E．coli DH5α是否含有目的基因（GFP基因）的重组植物表达载体pCAMBIA2300－35S－GFP－OCS，然后从E．coli DH5α中提取也构建完成的重组植物表达载体pCAMBIA2300－35S－GFP－OCS；利用电转化的方法将重组植物表达载体pCAMBIA2300－35 S－GFP－OCS转入到小球藻细胞中；将电转的小球藻在含有100 mg／L 卡那霉素的BBM固体培养基中筛选出单克隆，将单克隆在含有15 mg／L卡那霉素的BBM液体培养基中扩大培养，然后利用PCR和RT－PCR预测绿色荧光蛋白基因（GFP基因）的存在与否和表达情况，再利用SDS－PAGE和荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况。通过SDS－PAGE和荧光倒置显微镜观察结果表明绿色荧光蛋白（GFP）在小球藻中表达成功。试验结果表明重组植物表达pCAMBIA2300－35 S－OCS能够在小球藻中表达外源蛋白，以及利用GFP的荧光特性研究小球藻的生理生化差异；也为小球藻在沙漠环境上的应用提供基础。