濒危植物蒙古扁桃ISSR反应体系优化

摘要

为利用简单重复序列区间(inter simple sequence repeat,简称ISSR)技术研究蒙古扁桃资源遗传多样性评价和种质资源鉴定,利用正交试验法进行L16(45)正交设计,从Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq聚合酶活性和模板DNA质量5种因素和4个浓度水平来优化蒙古扁桃ISSR-PCR反应体系.结果表明,最佳反应体系如下:在25μL反应体系中加入2.0 U Taq聚合酶,引物浓度0.80μmol/L,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTPs浓度0.25 mmol/L,模板DNA质量50 ng.对蒙古扁桃ISSR-PCR反应影响程度排序依次为Taq聚合酶活性>引物浓度>Mg2+浓度>dNTPs浓度>模板DNA质量.