铁线莲属植物ISSR-P CR反应体系优化及遗传多样性分析

摘要

对铁线莲属(Clematis Linn.)植物基因组DNA的ISSR-PCR反应体系进行了优化,并采用ISSR分子标记对32个铁线莲属植物(包括8个野生种、1个变种和23个品种)及2个近缘属植物的遗传多样性进行研究.结果显示:铁线莲属植物基因组DNA ISSR-PCR最佳反应体系的总体积为25.0μL,包括40 ng·μL-1模板DNA 1.0μL、0.4μmol·L-1引物1.0μL、0.15 mmol·L-1 dNTPs 2.0μL、10×Ex Taq Buffer(Mg2+Plus)2.0μL、TaKaRa Ex Taq酶0.2μL和ddH2 O 18.8μL.对32个铁线莲属植物及2个近缘属植物基因组DNA的ISSR-PCR分析结果显示:共扩增出172个条带(位点),平均每条引物扩增出13.2个位点,其中,多态性位点168个,平均每条引物扩增出12.9个多态性位点,平均多态性位点百分率为98.2％.聚类分析结果显示:32个铁线莲属植物及2个近缘属植物的遗传距离在0.22～1.21之间.在遗传距离1.02处,将32个铁线莲属植物分为3个大组,'杰出'('Superba')单独聚为1个大组,'斯托尔韦克'('Stolwijk Gold')和'柠檬之梦'('Lemon Dream')聚为1个大组,其余植物聚为第3大组;在遗传距离0.92处,将第3大组进一步划分为3个亚组,第1亚组包括'阿迪森'('Addisonii')、'帕斯卡'('Pascal')和'樱桃唇'('Cherry Lip'),第2亚组包括短柱铁线莲(C.cadmia Buch.-Ham.ex Wall.)、灰叶铁线莲〔C.canescens(Turcz.)W.T.Wang et M.C.Chang〕、毛蕊铁线莲(C.lasiandra Maxim.)、曲柄铁线莲(C.repens Finet et Gagnep.)、'铃儿响叮当'('Jingle Bells')和'雀斑'('Freckles'),第3亚组包括吴兴铁线莲(C.huchouensis Tamura)等20个铁线莲属植物;在遗传距离0.77处,将第3亚组划分为7个小组.研究结果表明:ISSR分子标记能够应用于铁线莲属植物的遗传多样性分析.