重组人神经肽Y融合蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备与鉴定

摘要

目的:构建人神经肽Y (NPY)基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备兔抗人NPY抗血清.方法:取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a - NPY转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS—PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2 - NTA亲和层析纯化,以纯化后的融合蛋白pET28a - NPY为抗原免疫家兔,获得抗血清,Western blotting、ELISA法鉴定获得的抗血清.结果:经IPTG诱导含有pET28a - NPY重组质粒的DE3菌,表达出重组人NPY融合蛋白.重组蛋白经Ni2+ - NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫家兔制备了多克隆抗体,Western blotting、ELISA法证实多克隆抗体制备成功.结论:成功表达了人NPY蛋白并获得了其多克隆抗体,为进一步研究人NPY蛋白的功能奠定了基础.