5型肺炎球菌结合物原液中游离多糖分离方法的建立及验证

摘要

目的 建立和验证有效分离5型肺炎球菌结合物原液(结合物原液)中游离多糖的方法,以供测定游离多糖含量.方法 通过游离多糖添加回收率试验以及氯化钠浓度对咔唑-硫酸法吸光度值影响试验,选择结合物原液中游离多糖和多糖-蛋白结合物分离时最佳的氯化钠浓度;通过蛋白回收率试验筛选出该条件下所能沉降蛋白质的浓度范围;比较标准曲线经脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,NaDC)/HCl法处理前后吸光度值的变化,验证NaDC/HCl法对多糖含量检测的影响;对所建立方法的专属性、精密度及准确度进行验证.结果 NaDC/HCl法处理结合物原液时的最佳氯化钠浓度为0.15 mol/L;结合物原液中蛋白浓度在100 μg/ml以内,NaDC/HCl法能实现蛋白质的完全沉淀;NaDC对多糖含量检测无干扰;该方法专一沉淀蛋白质,而对游离多糖无影响;准确度验证试验的回收率在93.17％～102.59％之间;日间以及日内的精密度变异系数均小于10％.结论 NaDC/HCl法能充分分离结合物原液中的多糖-蛋白结合物和游离多糖,具有良好的准确度和重复性,适用于5型肺炎球菌结合物原液中游离多糖含量的测定.