土曲霉植酸酶基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达

摘要

参考已报道的植酸酶基因phyA全序列设计一对引物,用PCR方法从土曲霉(Aspergillus terreus)总DNA中扩增到去除信号肽和内含子后约1.4kb的phyA基因编码区片段,对该片段进行了克隆与序列测定.进一步用该片段构建了pPIC9K-phyA分泌型表达载体,并转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115.通过表达产物的酶活性检测和SDS-PAGE电泳分析,植酸酶在重组转化子中得到了有效分泌和高效表达.摇瓶诱导发酵132 h后发酵液中植酸酶的活性可达167 u·mL-1;表达产物在pH2.0～8.0均有活性,最适pH为5.5,最适温度为55℃.