体内遗传标记成团肠杆菌固氮质粒pEA9

摘要

用卡那霉素抗性(Kanr)基因对成团肠杆菌固氮质粒pEA9进行活体遗传标记.将来自质粒pEA9的3.0 kb片段(nif ENX)克隆到pBR322载体中,再将卡那霉素抗性(Kanr)基因插入到3.0 kb的片段中,构建成供体质粒pST5.将该质粒转化到含有待标记质粒pEA9的E.a.339菌株中,然后在AP培养基中消除供体质粒,筛选得到40个失去了pST5并保持卡那霉素抗性的克隆,分析表明它们不是质粒pEA9和pST5的共整合体,而是卡那霉素抗性基因通过两个质粒在nifENX区域内的DNA间的同源重组整合到了质粒pEA9上.